تقدير okb tkb في مياه الشرب. الدراسات الميكروبيولوجية للمياه

تستند المتطلبات الصحية لنوعية مياه الشرب والاحتياجات المنزلية على المبدأ الذي يركز على جودة المياه ، والتي تعتمد عليها صحة الإنسان وظروفه المعيشية. وفقا للتشريعات الصحية الحديثة ، يجب أن تكون مياه الشرب آمنة من حيث الأوبئة والإشعاع ، وغير ضارة من حيث التركيب الكيميائيولها خصائص حسية مواتية.

تتحدد سلامة مياه الشرب في حالة الوباء من خلال امتثالها لمعايير المؤشرات الميكروبيولوجية. التركيب الميكروبيولوجي لمياه الشرب هو المؤشر الرئيسي على جودتها وصلاحيتها للاستهلاك. هذا يأخذ في الاعتبار التلوث البكتيري والفيروسي.

يتم تقييم السلامة الوبائية لمياه الشرب في SanPiN من خلال عدة مؤشرات. يتم تعيين دور كبير فيما بينها للبكتيريا القولونية المقاومة للحرارة كمؤشرات حقيقية للتلوث البرازي و القولونيات الكلية.

البكتيريا القولونية الشائعة (CBC) هي قضبان سالبة الجرام ، سالبة للأكسيداز ، لا تشكل بوغًا يمكن أن تنمو على وسط اللاكتوز التفاضلي ، وتخمر اللاكتوز إلى حمض وغاز عند درجة حرارة +37 لمدة 24-48 ساعة.

البكتيريا القولونية المقاومة للحرارة (TCB) هي جزء من OKB ولها جميع خصائصها ، ولكن على عكسها ، فهي قادرة على تخمير اللاكتوز إلى حمض وألدهيد وغاز عند درجة حرارة +44 لمدة 24 ساعة. وبالتالي ، يختلف TKB عن OKB في قدرته على تخمير اللاكتوز إلى حمض وغاز عند درجة حرارة أعلى. يجب أن تكون البكتيريا القولونية الشائعة والمقاوم للحرارة غائبة في 100 مل من ماء الشرب (في أي من العينات مع تكرار التحليل ثلاث مرات).

في شبكة توزيع أنظمة إمداد مياه الشرب المركزية الكبيرة (مع عدد العينات المدروسة 100 على الأقل في السنة) ، يُسمح بـ 5٪ من العينات غير المعيارية للبكتيريا القولونية الشائعة ، ولكن ليس في عينتين متتاليتين تؤخذان في وقت واحد.

يتم تحديد العدد الإجمالي للكائنات الحية الدقيقة (العدد الإجمالي للميكروبات - TMC) من خلال النمو على أجار ببتون اللحوم عند درجة حرارة الحضانة 37. يستخدم هذا المؤشر لتوصيف كفاءة تنقية مياه الشرب ، ويجب أخذها في الاعتبار عند مراقبة جودة المياه في ديناميات. يعد الانحراف الحاد لـ TMF حتى في حدود القيمة القياسية (ولكن ليس أكثر من 50 في 1 مل) بمثابة إشارة إلى حدوث انتهاك في تقنية معالجة المياه. قد يشير نمو TMP في مياه شبكة التوزيع إلى حالتها الصحية غير المواتية ، مما يساهم في تكاثر الكائنات الحية الدقيقة بسبب تراكم المواد العضوية أو التسرب ، مما يؤدي إلى امتصاص المياه الجوفية الملوثة.

الخلايا الرمية الهوائية ليست سوى جزء من الرقم الإجماليالميكروبات في الماء ، لكنها تعتبر مؤشراً صحياً هاماً لنوعية المياه ، إذ ما بين درجة تلوثها المواد العضويةوعدد الميكروبات هناك علاقة مباشرة. بالإضافة إلى ذلك ، يُعتقد أنه كلما زاد العدد الإجمالي للميكروبات ، زاد احتمال وجود الكائنات الدقيقة المسببة للأمراض في الماء. يجب ألا يتجاوز عدد الميكروبات في ماء الصنبور 100.

يتم تحديد سلامة مياه الشرب بمعنى وبائي من خلال امتثالها لمعايير المؤشرات الميكروبيولوجية (الجدول 1).

الجدول 1. المؤشرات الميكروبيولوجية لمياه الشرب

مفهوم الكائنات الحية الدقيقة الإرشادية الصحية

المتطلبات الرئيسية للكائنات الدقيقة الإرشادية الصحية: 1. يجب أن يكون لها موطن طبيعي مشترك مع الكائنات الدقيقة المسببة للأمراض وأن يتم إطلاقها في البيئة الخارجية في بأعداد كبيرة؛ 2 بوصة بيئة خارجيةالموائل ، يجب أن تكون الكائنات الحية الدقيقة الإرشادية موزعة بالتساوي قدر الإمكان وأن تكون أكثر مقاومة من الكائنات المسببة للأمراض. يجب أن تظل في الماء لفترة أطول ، من الناحية العملية لا تتكاثر ، وتكون أكثر مقاومة للعوامل الضارة المختلفة ، ويجب أن تظهر تباينًا أقل في الخصائص والخصائص ؛ 3. يجب أن تكون طرق تحديد الكائنات الدقيقة الإرشادية الصحية بسيطة وذات درجة موثوقية كافية.

من وجهة نظر علم الأحياء الدقيقة الصحي ، يتم إجراء تقييم جودة المياه من أجل تحديد الخطر أو السلامة الصحية والوبائية. من أجل صحة الإنسان. يلعب الماء دور مهمفي نقل مسببات الأمراض للعديد من الالتهابات المعوية بشكل رئيسي.

إن التحديد الكمي المباشر لجميع الإصابات بمراقبة جودة المياه غير ممكن بسبب تنوع أنواعها وتعقيد التحليل.

إن تحليل عينة ماء واحدة فقط لاحتمال وجود مسببات الأمراض من حمى التيفوئيد ، نظير التيفوئيد A ، نظير التيفود B ، الزحار ، اليرقان المعدي ، حمى الماء والتولاريميا فيها سيحمل بالكامل طاقم العمل حتى في مختبر بكتيريولوجي كبير. بالإضافة إلى ذلك ، لن يتم تقديم الإجابة في هذه الحالة إلا بعد أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع ، أي عندما يكون السكان قد شربوا بالفعل المياه المدروسة لفترة طويلة.

في ضوء عدم الجدوى الواضحة لتعريف مفصل لسلامة المياه ، حتى في أواخر التاسع عشرلقرون ، بذلت محاولات لاستبدال البحث عن جميع الميكروبات المسببة للأمراض المائية بميكروب واحد ، وإن كان غير مُمْرِض ، ولكنه موجود باستمرار في براز الإنسان. ثم يمكن اعتبار أنه إذا كانت المياه قيد الدراسة ملوثة بالفعل بالبراز ، فيمكن أن تكون خطرة على الشرب ، حيث يمكن العثور على كل من ناقلات المرضى والناقلات بين السكان الأصحاء. نجح البحث عن مثل هذه المؤشرات البكتريولوجية للتلوث البرازي. اتضح أن ثلاثة من الميكروبات التالية موجودة باستمرار في براز الإنسان: 1) الإشريكية القولونية. 2) المكورات المعوية. 3) البكتيريا اللاهوائية المكونة للجراثيم ، خاصة بك. بيرمينجينس.

وبالتالي ، تسود الإشريكية القولونية في مياه الصرف المنزلية. لكنها ليست هي فقط المزيد من المحتوى. تكمن القيمة الرئيسية للمؤشر البكتيري للتلوث البرازي في حقيقة أن معدل الوفيات من معظم الميكروبات المسببة للأمراض. فقط إذا تم استيفاء هذا الشرط ، فإن الميكروب الموجود باستمرار في براز الإنسان سيكون مؤشرًا على التلوث البرازي.

إذا اقتربنا من سكان الأمعاء الدائمين المكتشفين من وجهة النظر هذه ، فسنجد ما يلي: ميكروبات مجموعة Bac. تستمر مادة perfingens في الماء لفترة أطول بكثير من الميكروبات المسببة للأمراض ؛ المكورات المعوية ، على العكس من ذلك ، تموت في وقت أقرب بكثير ؛ بالنسبة للإشريكية القولونية ، فإن وقت حفظها في الماء يتوافق تقريبًا مع وقت بقاء الميكروبات المسببة للأمراض.

لذلك ، فإن المؤشر الصحي البكتريولوجي الرئيسي للمياه هو الإشريكية القولونية. فقط في روسيا ، الدولة الوحيدة في العالم ، تتحكم بكتيريا مجموعة Escherichia coli (مؤشر BGKP) في جودة المياه. تضم هذه المجموعة جميع ممثلي مجموعة البكتيريا المعوية والممثلين الانتهازيين.

وفقًا لـ GOST 2874-73 و GOST 18963-73 ، تشتمل بكتيريا مجموعة Escherichia coli (ECG) على عصيات سالبة الجرام وغير بوغية تخمر اللاكتوز أو الجلوكوز إلى حمض وغاز عند 37 درجة في 24 ساعة ولا تفعل ذلك. لها نشاط أوكسيديز. تشمل CGBs ممثلين عن أجناس مختلفة - Escherichia و Citrobacter و Enterobacter و Klebsiella ، ولكن يتم إطلاقهم جميعًا في البيئة من أمعاء البشر والحيوانات. لهذا السبب ، فإن اكتشافهم في بيئةيجب اعتباره مؤشرا على التلوث البرازي.

من بين الأجناس المدرجة في BGKP ، يتمتع جنس Escherichia بأعلى قيمة صحية وإرشادية. يعتبر وجود كل هذه البكتيريا في البيئة تلوثًا برازيًا جديدًا.

Escherichia - هي واحدة من الأنواع الخلفية لأمعاء البشر والحيوانات. جنس Escherichia ، بما في ذلك نوع E. coli ، مؤشر على تلوث برازي جديد ، سبب محتملالالتهابات السامة. يتم التعامل مع ممثلي الجنس في الماء على أنهم بكتيريا القولونية المقاومة للحرارة.

Citrobacter - تعيش في مياه الصرف الصحي والتربة والأشياء البيئية الأخرى ، وكذلك في براز المرضى الأصحاء ومرضى AII. ينتمون إلى مجموعة البكتيريا الانتهازية. (كتاب مرجعي للقاموس الميكروبيولوجي ، 1999)

تشمل عيوب citrobacter مثل SPMO ما يلي:

1. وفرة من نظائرها في البيئة الخارجية.

2. التباين في البيئة الخارجية.

3. مقاومة غير كافية للآثار الضارة.

4. القدرة على التكاثر في الماء.

5. مؤشر ضبابي حتى لوجود السالمونيلا.

بحث السنوات الأخيرةكشف عدم وجود علاقة مباشرة بين وجود البكتيريا المسببة للأمراض والمؤشرات في الماء. في المناطق ذات الضغط البشري الشديد على اجسام مائيةكان هناك انخفاض في محتوى الكائنات الدقيقة المؤشر مع تغيير في خصائصها البيولوجية والثقافية على خلفية الغلبة الكمية للبكتيريا المسببة للأمراض والممرضة المحتملة.

Enterobacter - تعيش في أمعاء البشر والحيوانات الأخرى ، وتوجد في التربة والمياه ، منتجات الطعام، استدعاء الأمراض المعوية ، والجهاز البولي التناسلي ، والجهاز التنفسي ، والتهابات قيحية البشرية.

كليبسيلا - تعيش في الماء والتربة والغذاء والأمعاء والجهاز التنفسي للإنسان والثدييات والطيور.

في عام 1910 تم اقتراح المكورات المعوية (Enterococcus faecalis ، Enterococcus faecium) لدور SPMO.

المكورات المعوية هي جنس من البكتيريا اللاهوائية اللاهوائية اللاهوائية كيميائية التغذية العضوية الجرام + البكتيريا. الخلايا متعددة الأشكال. موزعة على نطاق واسع في الطبيعة. هم أحد الأنواع الخلفية لأمعاء البشر والثدييات والطيور. غالبًا ما توجد في فلورا جلد العجان والجهاز التناسلي ، وتجويف الأنف ، والبلعوم ، والأنف. تحيا طويلا في التربة والمنتجات الغذائية.

فوائد المكورات المعوية مثل SPMO:

1. موجود باستمرار في الأمعاء البشرية ويتم إطلاقه باستمرار في البيئة الخارجية. في الوقت نفسه ، تعيش Enterococcus faecalis بشكل أساسي في الأمعاء البشرية ، لذلك يشير اكتشافها إلى وجود تلوث ببراز الإنسان. إلى حد أقل ، تحدث المكورات المعوية البرازية في البشر. يوجد هذا الأخير بشكل أساسي في أمعاء الحيوانات ، على الرغم من أن Enterococcus faecalis نادر أيضًا نسبيًا.

2. غير قادر على التكاثر في البيئة الخارجية ، تتكاثر Enterococcus faecium بشكل أساسي ، ولكن لها أهمية وبائية أقل.

3. لا يغير خصائصه في البيئة الخارجية.

4. ليس له نظائر في البيئة الخارجية.

5. مقاومة التأثيرات البيئية الضارة. المكورات المعوية مقاومة للكلور 4 مرات أكثر من الإشريكية القولونية. هذه هي ميزته الرئيسية. بسبب هذه الخاصية ، يتم استخدام المكورات المعوية للتحقق من جودة كلورة المياه ، وكذلك مؤشر على جودة التطهير. يتحمل درجة حرارة 60 درجة مئوية ، مما يسمح باستخدامه كمؤشر على جودة البسترة. مقاومة لتركيزات الملح الشائعة بنسبة 6.5-17٪. مقاومة لدرجة الحموضة في حدود 3-12.

6. تم تطوير وسائط انتقائية للغاية للإشارة إلى المكورات المعوية. معدل بقاء المكورات المعوية في الماء يقترب من معدل بقاء البكتيريا المعوية المسببة للأمراض. المكورات المعوية هي بحق الاختبار الصحي الإرشادي الثاني بعد الإشريكية القولونية في دراسة مياه الشرب.

حاليًا ، تم تقنين القياس المعوي في معايير المياه الدولية كمؤشر على تلوث البراز الطازج. عندما يتم العثور على الإشريكية القولونية غير النمطية في الماء ، فإن وجود المكورات المعوية يصبح المؤشر الرئيسي للتلوث البرازي الطازج. لسوء الحظ ، في SanPiN 2.1.4.1074-01 لمياه الشرب ، لم يتم توفير تعريف المكورات المعوية.

تعتبر مجموعة Proteus السبب وراء عمليات التعفن في الطبيعة ، وبالتالي ، كمؤشرات على وجود المواد العضوية في مياه الخزانات. وهذا ينطبق بشكل أساسي على نوع واحد - Pr. vulgaris؛ النوع الثاني - Pr.mirabilis - هو أحد سكان أمعاء الإنسان والحيوان. هذا الاختلاف البيئي جعل من الممكن الحكم على طبيعة تلوث المياه ودرجة سلامتها الوبائية. يمكن أن يكون Pr.vulgaris مؤشرًا على التلوث البرازي ، Pr.vulgaris - مؤشر على زيادة تركيز المادة العضوية بشكل عام. جوانب ضعيفةهذا المؤشر هو الوجود المتقطع لـ Pr.mirabilis في الأمعاء البشرية وقدرة كلا النوعين على التكاثر بشكل مكثف في الماء. لا توجد أيضًا طريقة بحث تسمح بمراعاة كلا النوعين بشكل تفاضلي عندما يكونان موجودين في نفس الوقت في عينة الاختبار. الطريقة المقترحة لا تفي بهذه المهمة.

لقد ثبت الآن أن بكتيريا جنس Proteus توجد في 98٪ من الحالات في إفرازات أمعاء الإنسان والحيوان ، منها 82٪ من حالات Pr.mirabilis. يشير الكشف عن البروتينات في الماء إلى تلوث الجسم بركائز متحللة ويشير إلى مشاكل صحية شديدة. قياس البروتينات معترف به رسميًا في الولايات المتحدة الأمريكية.

يتم تحديد جراثيم المطثيات التي تقلل الكبريتيد على أنابيب المياه من مصادر السطحلتقييم فعالية معالجة المياه التكنولوجية. يجب عدم وجود أبواغ البكتيريا التي تقلل الكبريتيد في 20 مل من مياه الشرب بعد الانتهاء من معالجة المياه.

كمؤشر على التلوث الفيروسي لمياه الشرب ، تشتمل SanPiN على coliphages ، الأقرب إلى الفيروسات المعوية في أصلها البيولوجي وحجمها وخصائصها ومقاومتها للعوامل البيئية. لا ينبغي الكشف عن Coliphages في 100 مل من مياه الشرب المعالجة.

يشرب الماء

عدم تطابق الماء مع المواد الكيميائية يجعلها غير صالحة للشرب. إذا لم يتم حماية مصدر المياه الخاص بك من تأثير مباشرأنظمة البيئة أو المرافق قديمة أو لم يتم تنظيفها لفترة طويلة ، ومن ثم فإن إجراء اختبار ميكروبيولوجي ضروري ببساطة. صحتك وسلامتك تعتمد على ذلك! هذا مهم بشكل خاص لأولئك الذين يستخدمون البئر. - الأرض تلامس التربة مباشرة مما يعني أنها تهدد "بشربك" بالنترات والمعادن الثقيلة والأمونيا وبالطبع المواد العضوية الضارة التي تدخل التربة نتيجة لأنشطة المزارع أو الأراضي.

يوضح الجدول 1 المؤشرات الميكروبيولوجية لمعيار SanPiN 2.1.4.1074-01 الحالي لمياه الشرب:

الجدول 1. المعايير الميكروبيولوجية لمياه الشرب

التحليل الميكروبيولوجي القياسي

يتضمن التحليل الميكروبيولوجي القياسي لمياه الشرب في جامعة موسكو الحكومية تحديد ثلاثة مؤشرات: العدد الإجمالي للميكروبات ، وعدد البكتيريا القولونية الكلية والبكتيريا القولونية المقاومة للحرارة.

التحليل الميكروبيولوجي المتقدم

يشمل التحليل الميكروبيولوجي الممتد للمياه تحليل خمسة مؤشرات: العدد الإجمالي للميكروبات ، العدد الكلي للبكتيريا القولونية ، عدد البكتيريا القولونية المقاومة للحرارة ، عيار القولونية ومحتوى جراثيم البكتيريا التي تقلل من الكبريتيت.

التحليل الميكروبيولوجي للمسطحات المائية (البرك والأنهار والبرك)

غالبًا ما توجد مسطحات مائية في مواقعنا أو في مكان قريب ، حيث نحب نحن وأطفالنا قضاء الوقت بسرور. وبالطبع المياه في هذه الخزانات غير صالحة للشرب ولكن سلامتها للبشر وكذلك الشرب منظمة. يعرض الجدول 2 المؤشرات الميكروبيولوجية للمعيار الحالي لـ متطلبات النظافةللحماية سطح الماء(SanPiN 2.1.5.980-00)

الجدول 2. المعايير الميكروبيولوجية لاستخدام المياه الترفيهية ، وكذلك داخل حدود المناطق المأهولة بالسكان

التحليل الميكروبيولوجي القياسي (المياه السطحية)

يشمل التحليل الميكروبيولوجي للمياه غير المخصصة للشرب تحديد عدد مؤشرين: البكتيريا القولونية الكلية والبكتيريا القولونية المقاومة للحرارة.

التحليل الميكروبيولوجي المتقدم (المياه السطحية):

بالإضافة إلى المؤشرين الرئيسيين ، نقترح إجراء تحليل إضافي لمحتوى: coliphages ، الخمائر الانتهازية و micromycetes (الأقمار الصناعية المتكررة للأمراض الانتهازية) ومؤشر التنقية الذاتية للخزان.

تحديد البكتيريا من جنس السالمونيلا والجنس المعوي

مع وجود فائض كبير من معايير SanPiN 2.1.5.980-00 ، فضلاً عن التلوث البرازي المحتمل للخزان ، نقترح إجراء تحليل لوجود مسببات الأمراض الالتهابات المعوية(جنس السالمونيلا والمكورات المعوية).

قائمة المصطلحات

مجموع الوفرة الميكروبية (TMC)

تعرف الطريقة في يشرب الماءالعدد الإجمالي للكائنات الدقيقة الهوائية اللاهوائية والاختيارية (FMA) القادرة على الاستعمار على أجار المغذيات عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة ، ويمكن رؤيتها عند زيادة مضاعفة. يحدد هذا المؤشر البكتيريا المحتملة التي يمكن أن تضر بصحة الإنسان.

البكتيريا القولونية الشائعة (TCB)

بكتيريا القولون الشائعة (CBC) هي قضبان سالبة الجرام ، سالبة للأكسيداز ، لا تشكل بوغًا يمكن أن تنمو على وسط اللاكتوز التفاضلي ، وتخمر اللاكتوز إلى حمض ، وألدهيد وغاز عند درجة حرارة (37 + 1) درجة مئوية لـ ( 24-48) ساعة. العديد من أعضاء هذه المجموعة كائنات دقيقة البكتيريا العاديةوبالتالي ، فإن الزيادة في هذه المجموعة من الكائنات الحية الدقيقة قد تشير إلى تلوث مائي محتمل بفعل الإنسان (بما في ذلك البراز).

البكتيريا القولونية المقاومة للحرارة (TCB)

البكتيريا القولونية المقاومة للحرارة (TCB) هي من البكتيريا القولونية الشائعة ، ولها جميع خصائصها ، بالإضافة إلى أنها قادرة على تخمير اللاكتوز إلى حمض وألدهيد وغاز عند درجة حرارة (44 ± 0.5) درجة مئوية لمدة 24 ساعة. بالإضافة إلى OKB ، فهي مجموعة مؤشرات ، ومع ذلك ، فهي أكثر استقرارًا في البيئة: وهذا هو السبب في أن اكتشاف هذه المجموعة من الكائنات الحية الدقيقة في الماء يمكن أن يشير إلى تلوث لا لبس فيه بمنتجات النفايات البشرية.

coliphages

Coliphages ، التي تم تحديدها بالطريقة القياسية (MUK 4.2.1018-01) ، هي فيروسات الإشريكية القولونية (Escherichia coli) ويعتبرها علماء الأوبئة طريقة إضافية ، وأحيانًا أكثر حساسية ، في تحديد تلوث المياه بالكائنات الحية الدقيقة لـ E. مجموعة القولونية. جسيمات الفيروس ، وعلى وجه الخصوص ، هي أكثر مقاومة للبيئة من البكتيريا المضيفة. في هذا الصدد ، يمكن أن يكون وجود coliphages بمثابة علامة موثوقة للتلوث البرازي القديم لمصدر المياه. تم إثبات وجود علاقة مباشرة بين محتوى الخلايا الفطرية في الماء والفيروسات المعوية الخطرة على الإنسان ، لذلك قد يشير وجود البكتيريا في الماء إلى عدوى فيروسية للمصدر. الوثيقة التنظيمية الحالية (SanPiN 2.1.4.1074-01) تشير إلى عدم وجود coliphages في 100 مل من الماء.

جراثيم المطثيات الكبريتيتية

المطثيات التي تحد من الكبريتات هي كائنات دقيقة لا هوائية على شكل قضيب مكونة للجراثيم ، وهي مؤشر ميكروبيولوجي إضافي للتلوث البرازي للخزان. على عكس البكتيريا القولونية غير المستقرة نسبيًا والبكتيريا القولونية المقاومة للحرارة ، يمكن أن تعيش جراثيم المطثية في المسطحات المائية. منذ وقت طويل. تم العثور على المطثيات في أمعاء الإنسان والحيوانات الأليفة ، ومع ذلك ، إذا تم تناولها بكميات كبيرة من الماء ، فإنها يمكن أن تسبب التسمم الغذائي. تشمل المطثيات التي تحد من الكبريتات كلوستريديوم خطرة على البشر (كلوستريديوم بوتولينوم ، كلوستريديوم بيرفرينجنز ، كلوستريديوم تيتاني) ، والتي تسبب أمراضًا خطيرة. وفقًا للمعيار الحالي (SanPiN 2.1.4.1074-01) ، يجب أن تكون جراثيم Clostridia غائبة في 20 مل من الماء.

الخمائر الانتهازية و micromycetes

تشمل الخمائر الممرضة والميكروميسيتات (القوالب) الممرضة المشروطة مجموعة كبيرة غير متجانسة من الكائنات الفطرية التي يمكن أن تنمو بشكل رمي عند 37 درجة مئوية. ويشمل ممثلين مثل المبيضات البيضاء و المستخفية الحديثة ، والتي تعد عاملاً متكررًا في الأمراض الانتهازية التي تصيب الإنسان ، والتي تسبب داء المبيضات ( أمراض فطريةالجلد) ، القلاع ، إلخ. يمكن أن تكون الكائنات الحية الدقيقة الأخرى (Cladosporium cladosporioides ، Aspergillusniger) محفزات نشطة لتفاعلات الحساسية ، وأحيانًا تسبب الحساسية نفسها. في الاتحاد الروسي ، الماء غير موحد للقوالب وكائنات الخميرة في الماء.

تحديد مؤشر التنظيف الذاتي (من MUK 4.2.1884-04)

لم يتم توحيد العدد الإجمالي للكائنات الحية الدقيقة في مياه الخزانات في مناطق الاستجمام ، نظرًا لأن مستوى هذه المجموعة من الكائنات الحية الدقيقة يعتمد إلى حد كبير على خصائص طبيعيةكل كائن ، موسم ، إلخ.

ومع ذلك ، عند اختيار مصدر جديد لإمدادات المياه أو مكان للاستجمام في مياه الخزانات ، من الضروري أيضًا تحديد إجمالي السكان الميكروبيين ، الذي ينمو:

عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة ؛
عند 22 درجة مئوية لمدة 72 ساعة.

يفترض أن:

تم تقديم TMC عند 37 درجة مئوية بالنسبة للجزء الاكبرالنبتات الدقيقة alochthonous (تم إدخالها في الخزان نتيجة للتلوث البشري ، بما في ذلك التلوث البرازي) ؛
يتم تمثيل TMP عند 20-22 درجة مئوية ، بالإضافة إلى النبتات الدقيقة الأصلية (طبيعية ، مميزة لهذا الخزان).

تجعل نسبة أعداد هذه المجموعات من الكائنات الحية الدقيقة من الممكن الحكم على شدة عملية التنقية الذاتية. في نهاية عملية التنظيف الذاتي ، يكون معامل OMC 22 درجة مئوية / OMC 37 درجة مئوية. في أماكن التلوث بمياه الصرف الصحي المنزلية ، تكون القيم العددية لكلا المجموعتين متقاربة.

المؤشر يسمح لك بالحصول على ملفات معلومة اضافيةعلى الحالة الصحية للمسطحات المائية ، مصادر التلوث ، عمليات التنقية الذاتية.

8.1 تحديد العدد الإجمالي للكائنات الحية الدقيقة التي تشكل مستعمرات على أجار المغذيات

8.1.1. تعريف مفهوم المؤشر

تحدد الطريقة في مياه الشرب العدد الإجمالي للكائنات الدقيقة الهوائية اللاهوائية والاختيارية (FMC) القادرة على تكوين مستعمرات على أجار المغذيات عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة ، ويمكن رؤيتها بزيادة مضاعفة.

8.1.2. إجراء التحليل

من كل عينة ، يتم تلقيح ما لا يقل عن مجلدين من 1 مل.

بعد الخلط الكامل ، تُضاف عينات الماء 1 مل في أطباق بتري المعقمة ، تفتح الأغطية قليلاً. بعد إضافة الماء ، يتم صب (8-12) مل (على كوب بقطر 90-100 مم) من المادة المنصهرة والمبردة إلى (45-49) درجة مئوية أجار المغذيات في كل كوب بعد حرق حافة الطبق في الذي تم احتواؤه. ثم قم بخلط محتويات الأكواب بسرعة ، مع توزيعها بالتساوي على القاع بأكمله ، وتجنب تكوين فقاعات الهواء ، والحصول على أجار على حواف وغطاء الكوب. يتم تنفيذ هذا الإجراء على سطح أفقي ، حيث تُترك الصفائح حتى يتصلب الأجار.

يتم وضع الأجار المنصهر لفترة التحليل في حمام مائي أو ترموستات يحافظ على درجة حرارة (45-49) درجة مئوية.

بعد تصلب الأجار ، توضع الألواح المزروعة بالمزارع رأسًا على عقب في منظم حرارة وتحضينها عند درجة حرارة (37 ± 1) درجة مئوية لمدة (24 ± 2) ساعة.

8.1.3. حتى النتائج

يتم حساب جميع المستعمرات التي نمت على اللوحة ، والتي لوحظت بتكبير مزدوج. تؤخذ في الاعتبار فقط تلك الأطباق التي لم ينمو عليها أكثر من 300 مستعمرة معزولة.

يتم تلخيص عدد المستعمرات على كلا الصفيحتين وقسمته على اثنين. يتم التعبير عن النتيجة بعدد وحدات تشكيل المستعمرة (CFU) في 1 مل من عينة ماء الاختبار.

إذا لم يكن العد ممكنًا على إحدى اللوحتين ، فسيتم إعطاء النتيجة بناءً على عدد المستعمرات في لوحة واحدة. إذا أظهر صفيحتان نمو مستعمرة منتشر لا يغطي سطح اللوحة بالكامل ، أو نمت أكثر من 300 مستعمرة ولا يمكن تكرار الفحص ، فاحسب قطاع الطبق ثم أعد حساب السطح بالكامل. في هذه الحالات ، يلاحظ البروتوكول "عدد CFU / ml - تقريبًا".

إذا كان عدد المستعمرات على اللوحات غير ممكن ، فقم بتسجيل "النمو المستمر" في البروتوكول.

8.2 تحديد البكتيريا القولونية الشائعة والمتحملة للحرارة عن طريق الترشيح الغشائي (الطريقة الرئيسية)

8.2.1. تعريف مفهوم المؤشر

البكتيريا القولونية الشائعة (CBC) هي قضبان سالبة الجرام ، سالبة للأكسيداز ، خالية من الجراثيم قادرة على النمو على وسط اللاكتوز التفاضلي ، تخمر اللاكتوز إلى حمض ، ألدهيد وغاز عند درجة حرارة (37 ± 1) درجة مئوية لـ (24-) 48) ح.

8.2.2. مبدأ الطريقة

تعتمد الطريقة على تصفية حجم معين من الماء من خلال المرشحات الغشائية ، وزراعة المحاصيل على وسط مغذي تفاضلي مع اللاكتوز ، وتحديد المستعمرات لاحقًا من خلال الخصائص الثقافية والكيميائية الحيوية.

8.2.3. إجراء التحليل

8.2.3.1. ترتيب البحث

في دراسة مياه الشرب ، تم تحليل 3 مجلدات من 100 مل.

إذا تم الحصول على نتائج سلبية مستقرة ، يمكن ترشيح 300 مل من الماء من خلال مرشح واحد.

عند تصفية المياه ذات الجودة غير المعروفة ، يُنصح بزيادة عدد الأحجام التي تمت تصفيتها للحصول على مستعمرات معزولة على المرشح (على سبيل المثال ، 10 ، 40 ، 100 ، 150 مل من الماء).

يتم ترشيح الحجم المقاس للمياه من خلال مرشحات غشائية وفقًا للمتطلبات المنصوص عليها في الفقرة 7.

يتم وضع المرشحات على وسيط Endo المعد وفقًا للفقرة 5.4. توضع الأكواب ذات الفلاتر في ترموستات مقلوبة وتحضن عند درجة حرارة (37 ± 1) درجة مئوية لمدة (24 ± 2) ساعة.

إذا لم يكن هناك نمو على المرشحات أو كانت المستعمرات غشائية ، إسفنجية ، متعفنة ، شفافة ، غامضة ، فإنها تعطي إجابة سلبية: غياب OKB و TKB في 100 مل من ماء الاختبار. يتم الانتهاء من التحليل بعد 24 ساعة.

إذا تم الكشف عن نمو مستعمرات نموذجية معزولة إيجابية اللاكتوز على المرشحات: أحمر داكن ، أحمر مع أو بدون لمعان معدني أو نوع آخر من المستعمرات المماثلة مع بصمة على الجانب المعاكسالتصفية ، احسب عدد المستعمرات من كل نوع على حدة وتابع لتأكيد انتمائهم إلى OKB و TKB.

لتأكيد وجود OKB ، افحص:

جميع المستعمرات إذا نمت أقل من 5 مستعمرات على المرشحات ؛

ما لا يقل عن 3-4 مستعمرات من كل نوع.

لتأكيد وجود TKB ، يتم فحص جميع المستعمرات النموذجية ، ولكن ليس أكثر من 10.

يتم فحص كل مستعمرة معزولة مختارة من أجل:

وجود نشاط أوكسيديز.

الانتماء الجرام (الفحص المجهري لمستحضر ملطخ بالجرام أو اختبار Gregersen) ؛

تخمر اللاكتوز إلى حمض وغاز.

8.2.3.2. إجراء اختبار أوكسيديز

يتم وضع شريط من ورق الترشيح في طبق بتري نظيف ومبلل بـ 2-3 قطرات من كاشف اختبار أوكسيديز وفقًا للفقرة 5.7. يتم ترطيب الأنظمة الورقية النهائية بالماء المقطر. جزء من المستعمرة المعزولة مع حافظة زجاجية أو حلقة بلاتينية (يمكن أن تعطي الحلقة المعدنية نيتشروم رد فعل إيجابي خاطئ) مخططة على ورق الترشيح المُجهز. يعتبر التفاعل موجبًا إذا ظهر تلطيخ الجلطة في غضون دقيقة واحدة باللون البنفسجي البني (القسم 5.7.1 الخيار 1) أو الأزرق (القسم 5.7.2 الخيار 2 وأكسيداز NIB). مع رد فعل سلبي ، لا يتغير اللون في موقع تطبيق الثقافة. مع نتيجة إيجابية ، تم استبعاد هذه المستعمرة من إجراء مزيد من البحث.

إذا تم الحصول على نتيجة غير واضحة بما فيه الكفاية عند فحص المستعمرات الملطخة باللون الأحمر الداكن ، فمن الضروري نقل الثقافة من وسط إندو إلى أجار المغذيات. بعد الحضانة ، يتم إعادة الاختبار.

8.2.3.3. تحديد الانتماء للجرام

يتم أخذ مسحة من مستعمرة سلبية أوكسيديز ، ملطخة بالجرام ، ويتم فحصها مجهريًا.

على شريحة زجاجية منزوعة الدهن بالكحول ، يتم وضع قطرة واحدة من الماء المقطر في حلقة ، وتضاف كمية صغيرة من الثقافة من المستعمرة التي تم تحليلها وتنتشر على سطح الزجاج. يتم تجفيف اللطاخة في درجة حرارة الغرفة وتثبيتها ثلاث مرات من خلال شعلة الموقد. يتم وضع شريط من ورق الترشيح على المستحضر ويصب عليه محلول كربولي من الجنطيانا البنفسجي لمدة (0.5-1) دقيقة ، تتم إزالة الورق ، ويتم سكب محلول لوجول لمدة (0.5-1) دقيقة ، ويتم تصريف محلول لوجول ويغسل الزجاج بالكحول الإيثيلي لمدة (0.5-1) دقيقة حتى تتوقف الصبغة عن التساقط. ثم يُغسل الزجاج جيدًا بالماء ويُلطخ لمدة (1-2) دقيقة بفوكسين زيل المخفف بنسبة 1:10 بالماء المقطر. بعد غسل المستحضر وتجفيفه ، يتم فحص اللطاخة مجهريًا.

تم وصف تحضير الكواشف لتلوين الجرام في القسم 5.9.

الكائنات الحية الدقيقة سالبة الجرام لونها وردي ، موجبة الجرام زرقاء. البكتيريا القولونية هي قضبان سالبة الجرام.

يمكن استبدال صبغة جرام باختبار Gregersen الذي لا يتطلب استخدام البصريات.

اختبار Gregersen: في قطرة من محلول مائي بنسبة 3 ٪ من KOH على شريحة زجاجية ، يتم استحلاب كتلة بكتيرية مأخوذة من وسط صلب. بعد بضع ثوانٍ من التحريك بالحلقة ، يصبح المعلق مخاطيًا وتمتد الخيوط المخاطية خلف الحلقة ، مما يشير إلى أن ثقافة الاختبار أو المستعمرة تنتمي إلى الأنواع سالبة الجرام. في البكتيريا موجبة الجرام ، لا تتشكل الخيوط المخاطية - يكون التفاعل سلبيًا.

8.2.3.4. تحديد تخمر اللاكتوز

يتم زرع بقية المستعمرة المعزولة سالبة الجرام أوكسيديز بالتوازي في أنبوبين اختبار مع وسط اللاكتوز (ص. 5.6):

لتأكيد وجود OKB ، يتم تحضين المزرعة عند درجة حرارة (37 ± 1) درجة مئوية لمدة 48 ساعة ؛

لتأكيد وجود TKB ، يتم التلقيح في وسط مسخن مسبقًا إلى درجة حرارة (43-44) درجة مئوية وحضانة عند درجة حرارة (44 ± 0.5) درجة مئوية لمدة 24 ساعة.

يمكن إجراء حساب أولي لتكوين الحمض والغاز عند تأكيد الوسائط شبه السائلة و NIB (القسم 5.6) بعد (4-6) ساعات ، وفي حالة اكتشاف الحمض والغاز ، يتم إعطاء إجابة موجبة. في حالة عدم وجود حامض وغاز أو في وجود حمض فقط ، يتم ترك الأنابيب المزودة بمزارع للعدد النهائي لـ TKB حتى 24 ساعة. أنابيب بها محاصيل لتأكيد وجود TTB بعد المشاهدة بعد 24 ساعة والحصول على نتيجة سلبية تُترك للعد النهائي حتى 48 ساعة.

إذا كانت المستعمرة المراد فحصها صغيرة الحجم ، قم بتربيتها على مائل أجار المغذيات ، وبعد فترة الحضانة لمدة (18-24) ساعة ، قم بإجراء جميع الاختبارات التأكيدية اللازمة.

8.2.3.5. قم بإجراء اختبارات تأكيدية في تراكب المستعمرة أو النمو المستمر

في حالة ملاحظة وجود مستعمرات أو نمو مستمر على جزء من سطح المرشح أو كله ، يتم إجراء اختبار أوكسيديز عن طريق وضع مرشح الغشاء على دائرة من ورق الترشيح بقطر أكبر من المرشح ، أو ترطيبها بغنى بالكاشف ، أو على NIB قرص أوكسيديز مبلل بالماء المقطر. عندما تظهر العلامات الأولى للتفاعل ، ولكن ليس بعد أكثر من 5 دقائق ، يتم نقل مرشح الغشاء مرة أخرى إلى وسط Endo. بعد ظهور واضح للتفاعل ، يتم تحديد النتيجة. إذا ظهر لون بنفسجي بني أو أزرق (اعتمادًا على الكاشف المستخدم) ، فإن اختبار أوكسيديز يعتبر إيجابيًا.

إذا كانت جميع المستعمرات الموجودة في المرشحات إيجابية أوكسيديز ، فلن يتم أخذها في الاعتبار وتعطي ردًا حول عدم وجود OKB و TKB واستكمل التحليل.

في حالة حدوث تفاعل أوكسيديز سلبي ، يتم إجراء النخل حتى يتم الحصول على مستعمرات معزولة وتأكيد انتمائها إلى OKB و TKB وفقًا للفقرات 8.2.3.3-8.2.3.4 (التحليل النوعي).

8.2.4. المحاسبة عن النتائج

8.2.4.1. يتم حساب المستعمرات سالبة الجرام على أنها TBCs لاختبار أوكسيديز سلبي وتخمير اللاكتوز عند 37 درجة مئوية لإنتاج الحمض والغاز.

يتم حساب المستعمرات سالبة الجرام على أنها TKB في اختبار أوكسيديز سلبي وتخمير اللاكتوز عند 44 درجة مئوية مع إنتاج الحمض والغاز.

8.2.4.2. في حالة عدم وجود بكتيريا القولون الشائعة والمتحملة للحرارة على جميع المرشحات ، يتم تسجيل النتيجة على أنها "لا يوجد CFU من TCB في 100 مل" و "لا يوجد CFU من TCB في 100 مل".

8.2.4.3. في حالة تحديد جميع المستعمرات المشبوهة التي نمت ، يتم حساب عدد الوحدات المكونة للمستعمرات من TKB و TKB على جميع المرشحات ويتم التعبير عن نتيجة تحليل CFU في 100 مل من الماء.

يتم الحساب وفقًا للصيغة:

X هو عدد المستعمرات في 100 مل ؛

حجم المياه المصفى من خلال المرشحات التي تم حفظ الحساب عليها ؛

أ هو العدد الإجمالي للمستعمرات التي تم حسابها على هذه المرشحات.

1. عند زرع 3 مرشحات سعة 100 مل ، نمت مستعمرتان في 100 مل ، ولم يكن هناك نمو في المرشحتين الأخريين. سيكون عدد القولونيات الكلية أو القولونية المقاومة للحرارة:

CFU OKB (TKB) في 100 مل

2. عند بذر 10 ، 40 ، 100 و 150 مل على مرشحات ذات حجم مرشح 40 مل ، نمت 4 مستعمرات معزولة ، بحجم مرشح 100-3 OKB. تنضج المرشحات ذات الأحجام 10 مل و 150 مل ولا تخضع للمحاسبة. يتم تلخيص العدد الإجمالي لمستعمرات OKB (TKB) على المرشحات حيث تم الحصول على المستعمرات المعزولة وإعادة حسابها لحجم 100 مل.

CFU في 100 مل

8.2.4.4. إذا تم الحصول على نتائج غير متكافئة أثناء الفحص الانتقائي للمستعمرات من نفس النوع ، فسيتم حساب أعداد OKB أو TKB بين المستعمرات من هذا النوع وفقًا للصيغة:

، أين

X هو عدد البكتيريا المؤكدة من نفس النوع ؛

أ هو العدد الإجمالي للمستعمرات من هذا النوع ؛

- عدد المختبرين ؛

c هو عدد المستعمرات بنتيجة إيجابية.

يتم تلخيص نتائج المحاسبة لكل نوع من أنواع المستعمرات ثم حسابها وفقًا للبنود 8.2.4.3-8.2.4.4.

8.2.4.5. النتيجة النهائية معطاة: عدد CFU TCB في 100 مل ، منها عدد CFU TCB في 100 مل.

يمكن الحصول على نتيجة إرشادية من خلال الكشف عن مستعمرات القولون النموذجية على وسط إندو ، والتي تكونت من بكتيريا سالبة الجرام سالبة أوكسيديز. يتم تأكيد الإجابة النهائية من خلال نتائج تخمير اللاكتوز.

8.2.4.6. عند تراكب الخلايا أو النمو المستمر على جميع المرشحات (البند 8.2.3.5) ، في حالة تأكيد الانتماء إلى OKB و TKB ، يتم إصدار نتيجة نوعية "تم الكشف عن OKB في 100 مل".

إذا كانت جميع المستعمرات الموجودة على المرشح إيجابية أوكسيديز أو لم يتم تأكيد انتمائها إلى OKB و TKB ، يتم الانتهاء من التحليل ، يقول البروتوكول "مرشحات دفن".

في كلتا الحالتين ، يتم تكرار التحليل.

8.3 تحديد البكتيريا القولونية الشائعة والحرارية بطريقة المعايرة

8.3.1. تعريف مفهوم المؤشر

تعريف مفهوم مؤشرات OKB و TKB وفق البند 8.2.1.

8.3.2. منطقة التطبيق

يمكن استخدام طريقة المعايرة:

في حالة عدم وجود المواد والمعدات اللازمة لإجراء التحليل عن طريق الترشيح الغشائي ؛

عند تحليل الماء الذي يحتوي على نسبة عالية من المواد الصلبة العالقة ؛

في حالة غلبة البكتيريا الدقيقة في الماء ، مما يمنع إنتاج مستعمرات معزولة من البكتيريا القولونية الشائعة على المرشحات.

8.3.3. مبدأ الطريقة

تعتمد الطريقة على تراكم البكتيريا بعد تلقيح كمية محددة من الماء في وسط مغذي سائل ، تليها ثقافة فرعية على وسط غذائي كثيف تفاضلي مع اللاكتوز وتحديد المستعمرات عن طريق الاختبارات الثقافية والكيميائية الحيوية.

8.3.4. إجراء التحليل

في دراسة مياه الشرب الطريقة النوعية(الإشراف الصحي والوبائي الحالي ، التحكم في الإنتاج) تلقيح 3 مجلدات من 100 مل.

عند دراسة الماء لهذا الغرض تحديد الكميات OKB و TKB ، عند إعادة التحليل ، تلقيح: 3 مجلدات من 100 مل ، 3 مجلدات من 10 مل ، 3 مجلدات من 1 مل.

يتم تلقيح كل حجم من ماء الاختبار في وسط ببتون اللاكتوز المحضر وفقًا للفقرة 5.5. يتم تلقيح 100 مل و 10 مل من الماء في 10 و 1 مل من وسط اللاكتوز الببتون المركز ، ويتم تلقيح 1 مل من العينة في 10 مل من متوسط التركيز الطبيعي.

يتم تحضين المحاصيل عند (37 ± 1) درجة مئوية لمدة 48 ساعة على ألا تزيد عن 24 ساعة. يتم الحضانة تقييم أوليالمحاصيل. من الحاويات ، حيث يتم ملاحظة وجود النمو (التعكر) وتكوين الغاز ، يتم تلقيح حلقة بكتريولوجية في قطاعات وسط إندو (القسم 5.4.1) للحصول على مستعمرات معزولة.

تُترك الحاويات بدون نمو وتكوين غاز في منظم حرارة ويتم فحصها أخيرًا بعد 48 ساعة ، وتعتبر المحاصيل التي ليس لها علامات نمو سلبية ولا تخضع لمزيد من البحث. من الحاويات التي لوحظ فيها التعكر وتكوين الغاز أو العكارة فقط ، تتم البذر في قطاعات وسط إندو.

يتم تحضين التطعيمات على وسط إندو عند درجة حرارة (37 ± 1) درجة مئوية لمدة (18-20) ساعة.

مع تكوين العكارة والغاز في وسط التراكم والنمو على وسط إندو للمستعمرات النموذجية للبكتيريا إيجابية اللاكتوز: أحمر داكن أو أحمر ، مع أو بدون لمعان معدني ، محدب مع مركز أحمر وبصمة على المغذيات المتوسطة ، فإنها تعطي استجابة إيجابية لوجود البكتيريا القولونية الشائعة في حجم عينة معين.

مطلوب وجود OKB للتأكيد:

إذا لوحظ التعكر فقط في وسط التراكم ؛

إذا كان الانتماء إلى مستعمرات إيجابية اللاكتوز موضع شك من قبل الباحث. في هذه الحالات:

تحقق من وجود بصمة على وسيط Endo بعد حلقات مستعمرة مشبوهة ؛

إجراء اختبار أوكسيديز وفقًا للبند 8.2.3.2 ؛

تأكيد الانتماء إلى الجرام وفقًا للبند 8.2.3.3 ؛

يتم تأكيد القدرة على تكوين الغاز عن طريق تلقيح 1-2 مستعمرة معزولة من كل نوع من كل قطاع على الوسط باللاكتوز وفقًا للبند 5.6 ، يليه حضانة التلقيح عند درجة حرارة (37 ± 1) درجة مئوية لـ ( 24-48) ساعة.

في حالة عدم وجود مستعمرات معزولة ، يتم الغربلة على وسط إندو بالطرق البكتريولوجية التقليدية.

يتم إعطاء إجابة سلبية إذا:

لا توجد بوادر للنمو في بيئة التراكم ؛

لا يوجد نمو في قطاعات بيئة إندو ؛

نمت المستعمرات غير المميزة للبكتيريا القولونية (الشفافة ذات الحواف الخشنة والضبابية وما إلى ذلك) على قطاعات وسط إندو ؛

كانت جميع المستعمرات إيجابية أوكسيديز.

كانت جميع المستعمرات موجبة الجرام.

إذا لم يتم ملاحظة تكوين الغاز في الاختبار التأكيدي على الوسط الذي يحتوي على الكربوهيدرات.

لتحديد البكتيريا القولونية المتحملة للحرارةالعمل مع قطاعات من وسط Endo حيث نمت مستعمرات نموذجية إيجابية اللاكتوز. زرع 2-3 مستعمرات معزولة من كل نوع من كل قطاع في أنابيب اختبار مع أي من وسط اللاكتوز المحضر حسب الفقرة 5.6.

قبل البذر ، يتم تسخين الوسيط في حمام مائي أو في ترموستات إلى 44 درجة مئوية. مباشرة بعد التلقيح توضع الأنابيب في منظم حرارة وتحضينها عند درجة حرارة (44 ± 0.5) درجة مئوية لمدة 24 ساعة ، ويسمح بمشاهدة التطعيمات بعد (4-6) ساعات.

مع تكوين الغاز في وسط التراكم ، ونمو البكتيريا الموجبة للاكتوز على وسط إندو والكشف عن قدرة هذه البكتيريا على تخمير اللاكتوز إلى حمض وغاز لمدة 24 ساعة عند درجة حرارة 44 درجة مئوية ، فإنها تعطي إجابة موجبة لوجود عينة في هذا المجلد TKB ماء. في جميع الحالات الأخرى ، يعطون إجابة سلبية.

من المقبول تسريع إصدار استجابة لوجود TKB لتلقيح 1 مل من أحجام وسط التراكم ، حيث يتم ملاحظة العكارة وتكوين الغاز في أنبوب اختبار بوسط اللاكتوز الببتون مع تعويم وفقًا لـ البند 5.6 وتسخينه إلى درجة حرارة 44 درجة مئوية. تحفظ المحاصيل في منظم حرارة عند درجة حرارة (44 ± 0.5) درجة مئوية لمدة 24 ساعة ، إذا تم الكشف عن حمض وغاز ، فإنها تعطي إجابة إيجابية.

8.3.5. المحاسبة عن النتائج

في دراسة 3 مجلدات بحجم 100 مل ، يتم تقييم النتائج نوعيًا وإذا تم اكتشاف OKB و TKB في واحد على الأقل من المجلدات الثلاثة ، يتم إدخال إدخال في البروتوكول "الموجود في 100 مل".

في دراسة الطريقة الكمية ، يتم تحديد الرقم الأكثر احتمالية (MPN) لـ OKB و TKB وفقًا للجدول. 1.1 تطبيقات 1.

يتم الإبلاغ عن النتيجة بدون فاصل ثقة.

في حالة وجود استجابة سلبية لوجود TKB و TKB في جميع المجلدات التي تم فحصها ، يتم إصدار استنتاج في البروتوكول "غير موجود في 100 مل".

8.4 تحديد جراثيم المطثيات المقلصة للكبريتيت

8.4.1. تعريف مفهوم المؤشر

المطثيات المقلصة للكبريتات هي كائنات دقيقة لا هوائية على شكل قضيب مكونة للجراثيم تعمل على تقليل كبريتات الصوديوم على أجار كبريتات الحديد عند درجة حرارة (44 ± 1) درجة مئوية لمدة (16-18) ساعة.

8.4.2. مبدأ الطريقة

تعتمد الطريقة على زراعة المحاصيل في أجار كبريتات الحديد في ظل ظروف قريبة من اللاهوائية وإحصاء عدد المستعمرات السوداء.

8.4.3. إجراء التحليل

8.4.3.1. يتم تسخين عينة 20 مل من الماء في حمام مائي في أنابيب الاختبار عند درجة حرارة (75 ± 5) درجة مئوية لمدة 15 دقيقة لاستبعاد الأشكال الخضرية.

في دراسة المياه المكلورة ، يمكن حذف تسخين العينة.

من كل عينة من مياه الشرب ، يتم زراعة أو تصفية 20 مل. إذا لزم الأمر ، حدد وحدات التخزين بحيث لا تنمو أكثر من 10-15 مستعمرة في المحاصيل (على المرشحات). في هذه الحالة ، يسترشدون بنتائج الدراسات السابقة.

يتم إجراء تنقية المياه وفقًا للمتطلبات المنصوص عليها في الفقرة 7.

8.4.3.2. التحديد بالترشيح في أنابيب الاختبار

قبل التلقيح ، يتم صهر الأنابيب التي تحتوي على أجار كبريتات الحديد المحضرة وفقًا لـ 5.8 في حمام مائي (لا تغلي!). أثناء البذر ، يتم تسخين الوسط إلى (70-80) درجة مئوية في حمام مائي.

بعد تصفية الحجم المحدد من الماء ، يتم أخذ المرشح الغشائي بملاقط ملتهبة من حافتين متقابلتين ويتم ثنيه على شكل أنبوب يوضع في أنبوب اختبار مع أجار ساخن. جانب المرشح مع البكتيريا المستقرة مواجه للداخل. في هذه الحالة ، يتم تقويم الفلتر ووضعه على طول جدار أنبوب الاختبار.

مباشرة بعد التلقيح ، يتم تبريد الأنبوب الذي يحتوي على أجار ومرشح لخلق ظروف لاهوائية بسرعة عن طريق وضعه في وعاء به ماء بارد. زراعة المحاصيل عند درجة حرارة (44 ± I) م لمدة (16-18) ساعة.

8.4.3.3. التحديد بالترشيح في أطباق بتري

تمتلئ أطباق بتري بقطر (55-60) مم بطبقة رقيقة من أجار كبريتيت الحديد. بعد الترشيح ، ضع المرشح مع سطح المرشح لأسفل على وسط المغذيات الصلبة بحيث لا توجد فقاعات هواء تحت الفلتر. ثم صب أجار كبريتات الحديد المنصهر أعلى الطبق بحيث يلائم الغطاء بإحكام على الوسط لخلق ظروف لاهوائية. زراعة المحاصيل بدرجة حرارة (44 ± 1) درجة مئوية لمدة (16 - 1 8) ساعة.

8.4.3.4. التحديد عن طريق البذر المباشر

يتم تحضير قوارير أجار كبريتات الحديد وعينة الماء كما هو موضح في 8.4.3.1.

أضف إلى أنابيب الاختبار المعقمة:

10 مل في أنبوبي اختبار (بحجم 30 مل على الأقل) أو

5 مل في 4 أنابيب اختبار (15 مل لكل منهما).

تُسكب المحاصيل بأجار كبريتات الحديد الساخن بكمية تزيد عن حجم الماء مرتين. صب الوسيط على طول جدار أنبوب الاختبار ، وتجنب تكوين فقاعات الهواء. بعد ذلك ، يتم تبريد الأنبوب بسرعة عن طريق وضعه في وعاء به ماء بارد لخلق ظروف لاهوائية. يتم تحضين التطعيمات عند (44 ± 1) درجة مئوية لمدة (16-18) ساعة.

8.4.4. المحاسبة عن النتائج

فقط تلك المحاصيل التي يتم الحصول على مستعمرات معزولة فيها تخضع للمحاسبة الكمية. يتم عد المستعمرات السوداء ، وتنمو على المرشحات وفي سمك وسط المغذيات.

يتم التعبير عن نتيجة التحليل بعدد الوحدات المكونة للمستعمرات (CFU) لأبواغ المطثيات التي تخفض الكبريتيت في 20 مل من الماء.

إذا لم يكن هناك نمو للمستعمرات السوداء في جميع المرشحات ، فإن الإجابة هي "لا توجد في 20 مل من الماء".

إذا كان من المستحيل عد المستعمرات بسبب النمو المتكدس ، يتم تقييم النتيجة على أنها نوعية ، ويلاحظ البروتوكول "موجود في 20 مل". إذا لزم الأمر ، للحصول على نتيجة كمية ، يتم تكرار التحليل.

8.5 تعريف coliphages

8.5.1. تعريف مفهوم المؤشر

Coliphages هي فيروسات بكتيرية قادرة على تحلل الإشريكية القولونية وتشكيلها عند درجة حرارة (37 ± 1) درجة مئوية بعد (18 ± 2) h مناطق تحلل العشب البكتيري (لويحات) على أجار المغذيات.

8.5.2. طريقة المعايرة لتحديد الالتهابات البكتيرية

8.5.2.1. مبدأ الطريقة

يتكون تحديد الخلايا القشرية في مياه الشرب من التراكم الأولي للقوليفاج في وسط التخصيب على استزراع الإشريكية القولونية والتعرف اللاحق على مناطق التحلل (التنوير) لحشيش الإشريكية القولونية على أجار المغذيات.

8.5.2.2. منطقة التطبيق

تهدف هذه الطريقة إلى المراقبة الحالية لجودة مياه الشرب.

8.5.2.3. تحضير ثقافة الاختبار E. coli K12 StrR.

في جميع مراحل الدراسة ، يتم تحضير معلق بكتيري بالطريقة الآتية: يتم تلقيح زراعة الإشريكية القولونية في أنبوب اختبار بأجار مغذي مائل بالستربتومايسين (القسم 5.3.5). بعد (18 ± 2) ساعة من الحضانة عند درجة حرارة (37 ± 1) درجة مئوية ، اشطف البكتريا من المفصل بـ 5 مل من محلول ملحي معقم (0.85٪ محلول كلوريد الصوديوم) ووفقًا لمعيار التعكر ، قم بإعداد معلق من الإشريكية القولونية بتركيز 109 خلية بكتيرية في 1 مل.

يُسمح باستخدام مزرعة مرق لمدة 4 ساعات من الإشريكية القولونية التي يتم الحصول عليها عن طريق النمو في منظم الحرارة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. تركيز 109 خلايا بكتيرية E. coli موجود في 2 مل.

8.5.2.4. إجراء التحليل النوعي

أضف 10 مل من مرق مغذي 10 أضعاف (محضر وفقًا للفقرة 5.2.2) و 1 مل من الغسل المحضر لثقافة الاختبار أو 2 مل من مرق لمدة 4 ساعات (البند 8.5.2.3) في ماء الاختبار عينة بحجم 100 مل.

للتحكم في المزرعة ، يتم وضع 0.1 مل من غسول الإشريكية القولونية (أو 0.2 مل من مزرعة المرق لمدة 4 ساعات) في طبق بتري ومغطاة بآجار المغذيات.

توضع عينة ماء الاختبار (100 مل) وطبق بتري مع تحكم الإشريكية القولونية في منظم حرارة وتحضين عند درجة حرارة (37 ± 1) درجة مئوية لمدة (18 ± 2) ساعة.

بعد الحضانة ، يُسكب 10 مل من عينة ماء الاختبار في أنبوب اختبار ويضاف 1 مل من الكلوروفورم.

يتم إغلاق أنبوب الاختبار بمطاط معقم أو سدادة سيليكون ، ويُرج بقوة لتوزيع الكلوروفورم بالتساوي على حجم العينة ، ويترك في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة على الأقل حتى يترسب الكلوروفورم تمامًا.

في حالة الذوبان والمبردة مسبقًا إلى (45-49) درجة مئوية أجار المغذيات ، أضف الغسل المحضر من بكتيريا E. coli (البند 8.5.2.3) بمعدل 1.0 مل من الغسيل (أو 2 مل من مرق 4 ساعات ثقافة) لكل 100 مل من أجار.

انقل 1 مل من العينة المعالجة بالكلوروفورم (دون لمس الكلوروفورم) إلى طبق بتري معقم بواسطة ماصة من أنبوب اختبار واملأه بمزيج من المغذيات المذابة والمبردة إلى (45-49) درجة مئوية مع حجم أجار مغذي (12-15) مل ، بالإضافة إلى طبق بتريد إضافي للتحكم في مزارع الإشريكية القولونية ورجها برفق لمزج عينات الماء والأجار بالتساوي. من أجل التصلب الكامل ، تُترك الأكواب على المنضدة في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقائق. بعد التصلب ، تقلب الأكواب وتوضع في منظم الحرارة لمدة (18 ± 2) ساعة عند 37 درجة مئوية.

عند إجراء سلسلة من العينات ، يتم وضع تحكم عام للسلسلة بأكملها.

المحاسبة عن النتائج

عرض المحاصيل المنفذة في الضوء المنقول.

تعتبر العينة موجبة في وجود تحلل كامل وتوضيح لعدة لويحات ولوحة واحدة على الطبق مع عينة ماء في حالة عدم وجود مناطق تحلل على طبق التحكم.

يلاحظ بروتوكول التحليل: تم العثور على coliphages أو لم يتم العثور عليها في 100 مل من الماء (نتيجة نوعية).

إذا كانت هناك مناطق تحلل في التحكم في الثقافة ، فإن النتيجة تعتبر غير صالحة.

8.5.2.5. إجراء التحليل الكمي

صب عينة الماء التي تم فحصها بكمية 100 مل في 6 مجلدات: زجاجة واحدة سعة 50 مل و 5 أنابيب اختبار سعة 10 مل. إلى 50 مل من العينة ، أضف 5 مل من مرق المغذيات بعشرة أضعاف (وفقًا لـ 5.2.2) و 0.5 مل من الغسيل (أو 1 مل من مزرعة المرق لمدة 4 ساعات) من بكتيريا الإشريكية القولونية (البند 8.5.2.3) . في كل 10 مل من العينة ، أضف 1 مل من مرق المغذيات بعشرة أضعاف و 0.1 مل من الغسيل (أو 0.2 مل من مزرعة المرق لمدة 4 ساعات) من بكتيريا الإشريكية القولونية.

للتحكم في المزرعة ، يتم وضع OD مل من البكتيريا (أو 0.2 مل من مزرعة المرق لمدة 4 ساعات) من الإشريكية القولونية في طبق بتري ومليئة بأجار المغذيات.

تحضن المحاصيل عند درجة حرارة (37 ± 1) درجة مئوية لمدة 18 ± 2 ساعة.

بعد الحضانة ، صب 10 مل من حجم 50 مل في أنبوب اختبار. أضف 1 مل من الكلوروفورم إلى جميع أحجام الاختبار الستة. أغلق أنابيب الاختبار بمطاط معقم أو سدادات سيليكون ، ورجها بقوة لتوزيع الكلوروفورم بالتساوي على حجم العينة ، واتركها في درجة حرارة الغرفة لمدة 15 دقيقة على الأقل لترسيب الكلوروفورم.

في أجار المغذيات المذابة والمبردة سابقًا إلى (45-49) درجة مئوية ، أضف الغسل المحضر من بكتيريا E. coli (القسم 8.5.2.3) بمعدل غسيل 1.0 مل (أو 2 مل من ثقافة مرق لمدة 4 ساعات ) لكل 100 مل أجار. صب الخليط المحضر في أطباق بتري: 1 كوب للتحكم في ثقافة الإشريكية القولونية من أجل عدم التكاثر وكوب واحد لكل عينة ماء قيد الدراسة. مع التحليل المتزامن للعديد من عينات المياه ، يتم وضع عنصر تحكم واحد لثقافة الإشريكية القولونية.

بعد تصلب الأجار ، يتم تقسيم الأطباق المخصصة لتلقيح العينات إلى 6 قطاعات ، مصنفة وفقًا للأحجام قيد الدراسة. ضع قطرة واحدة من المادة الطافية (بدون الكلوروفورم) باستخدام ماصة باستور (الماصة الدقيقة أو الحلقة البكتريولوجية بضربة طولية) على كل قطاع من أنبوب الاختبار المقابل.

بعد أن تجف القطرات ، ضع الأكواب مع عينات الاختبار وكوب التحكم في ترموستات عند (37 ± 1) درجة مئوية لمدة (18 ± 2) ساعة.

المحاسبة عن النتائج

يتم عرض النتائج في ضوء الإرسال.

تتم المحاسبة من خلال وجود مناطق التنوير (التحلل) على قطاعات العشب الإشريكية القولونية.

عند استخدام طريقة البذر بالتنقيط باستخدام ماصة ، يتم تشكيل منطقة تحلل على شكل بقعة مستديرة أو لويحات فردية. عند زرع سكتة دماغية طولية بحلقة جرثومية ، يلاحظ التحلل على طول السكتة الدماغية.

تعتبر العينة إيجابية إذا كانت هناك منطقة تحلل في قطاع واحد على الأقل في حالة عدم وجود مناطق تحلل على لوحة التحكم.

يتم إجراء التقييم وفقًا لجدول الرقم الأكثر احتمالًا (MPN) لوحدات تشكيل اللويحات (PFU) (الجدول 1.2). يشير بروتوكول التحليل إلى العدد الأكثر احتمالا من coliphages في 100 مل من الماء ومدى التقلبات المحتملة: LF PFU (الحد الأدنى - الحد الأعلى) من coliphages في 100 مل. النتيجة شبه كمية.

إذا كانت هناك مناطق تحلل في طبق التحكم ، فإن النتيجة تعتبر غير صالحة.

8.5.3. طريقة مباشرة لتحديد coliphages

.واحد. مبدأ الطريقة

يتألف تحديد الخلايا اللبنية في مياه الشرب من دراسة الحجم الطبيعي للمياه (100 مل) عن طريق التلقيح المباشر والتسجيل اللاحق لمناطق التحلل (اللويحات) على العشب الإشريكية القولونية في أطباق بتري مع أجار المغذيات.

8.5.3.2. اختصاص

يتم تنفيذ الطريقة المباشرة لعزل coliphages من الماء بالتوازي مع طريقة المعايرة في الدراسات وفقًا للإشارات الوبائية.

8.5.3.3. إجراء تحليل

في أجار المغذيات بتركيز مزدوج (ص. 5.3.2) ، مذاب ومبرد إلى (45-49) درجة مئوية ، يضاف إي كولاي غسول (ص. 8.5.2.3) بمعدل 2.0 مل من الغسيل (أو 4 مل من 4 ساعات من ثقافة المرق) لكل 100 مل من الآجار ، اخلطيها. صب 100 مل من الماء في 20 مل من أنابيب الاختبار الكبيرة ، سخن حتى (35-44) درجة مئوية وعلى الفور (ليس أكثر من 5 دقائق بعد الوصول إلى درجة الحرارة المطلوبة) صب في 5 أطباق بتري وأضف على الفور 20 مل لكل طبق مخاليط أجار مع استزراع الإشريكية القولونية.

للتحكم في استزراع الإشريكية القولونية ، أضف 20 مل من ماء الصنبور المعقم ، مسخن مسبقًا إلى (35-44) درجة مئوية ، في طبق بتري واحد ، صب 20 مل من الآجار المحضر مع الإشريكية القولونية واخلطها برفق.

قلبي محتويات الكؤوس برفق واتركيها في درجة حرارة الغرفة حتى تتجمد. ضع اللوحات ذات الأجار المجمد رأسًا على عقب في منظم حرارة واحتضان عند درجة حرارة (37 ± 1) درجة مئوية لمدة (18 ± 2) ساعة.

المحاسبة عن النتائج

يتم عرض المحاصيل في الضوء المرسل.

يتم حساب النتائج عن طريق حساب وجمع اللوحات المزروعة في 5 أطباق بتري. يتم التعبير عن النتائج بوحدات تشكيل البلاك (PFU) لكل 100 مل من عينة الماء. يجب ألا تكون هناك لويحات في طبق التحكم.

في أغلب الأحيان ، تبدو مناطق التحلل مثل البقع الشفافة على خلفية العشب المستنبت لاختبار أجار المغذيات في شكل لويحات مستديرة معزولة (من 1 إلى 5-7) مم بقطر مع حدود محددة بوضوح أو محو.

في تركيزات عالية من الملتهمة ، لوحظ نمط مختلف من التحلل.

يعطي اندماج المستعمرات السلبية العشب "المفتوح" للإشريكية القولونية ، ونمو مستعمرات مفردة من الإشريكية القولونية على خلفية التحلل المستمر ، أو الافتقار التام للنمو على الطبق.

مع التلقيح المباشر ، يكون التحلل ممكنًا ، محجوبًا بأجار متصلب بشكل غير متجانس ، وكذلك مغلقًا بواسطة البكتيريا المصاحبة. يمكن أن تؤدي قطرات الأجار المتكثف وغير المتجانس من التلقيح المباشر إلى تكوين مصنوعات يدوية في حديقة الإشريكية القولونية التي تشبه التحلل بصريًا.

يمكن إجراء المحاسبة الأولية للنتائج بعد (5-6) ساعات من الحضانة. في هذه المرحلة ، في ظل وجود مناطق واضحة من التحلل ، يمكن إصدار إجابة أولية حول وجود coliphages في الماء.

يتم إجراء السجل الكمي النهائي للتلقيح المباشر بعد (18 ± 2) ساعة ويتم التعبير عن النتائج بعدد وحدات تشكيل البلاك (PFU) لكل 100 مل من عينة الماء.

إذا لوحظ نمو البلاك المتكدس وكان العد صعبًا ، فيمكن إصدار نتيجة نوعية وفقًا للبذر المباشر: "موجود في 100 مل من الماء".

إذا تم الحصول على نتيجة سلبية عند العمل بالطريقة المباشرة ، يتم إصدار الإجابة النهائية وفقًا لنتائج طريقة المعايرة.

إذا كانت هناك مناطق تحلل في طبق التحكم ، فإن نتيجة الدراسة تعتبر غير صالحة.

8.5.4. إعداد الضوابط

8.5.4.1. سيطرة سلبية

يؤكد التحكم السلبي عدم وجود تلوث بالعاثيات لوسائط المغذيات ، والأواني الزجاجية للمختبر ، والمعدات في مراحل التحضير والتحليل ، ويسمح لك أيضًا بتقييم قدرة ثقافة الاختبار E. coli لإعطاء عشب موحد.

الضبط السلبي هو دراسة ماء الصنبور المعقم ، الذي يتم إجراؤه بشكل مشابه لعينة الماء التي تم تحليلها. لذلك ، عند تحليل الماء بطريقة المعايرة ، يضاف 10 مل من ماء الصنبور المعقم إلى أنبوب اختبار إضافي. عند تحليل الماء بالتلقيح المباشر ، يضاف 20 مل من ماء الصنبور المعقم إلى طبق بتري سادس إضافي.

يتم فحص المحاصيل الإضافية بحثًا عن coliphages بنفس طريقة العينات الرئيسية.

عند تحليل سلسلة من العينات ، يمكن أن يكون هناك عنصر تحكم سلبي واحد لكل نوع من أنواع التحليل: المعايرة بالتحليل الحجمي والتحليل المباشر. في هذه الحالة ، يتم إجراء التحكم السلبي بعد معالجة جميع عينات هذه السلسلة.

إذا تم العثور على لويحات coliphages في لوحات التحكم السلبية ، فإن نتائج دراسة سلسلة كاملة من عينات المياه غير صالحة.

من الضروري التحقق من عقم المعدات المختبرية والأواني ووسائط المغذيات وتكرار تلقيح التحكم لنقاء سلالة اختبار الإشريكية القولونية K12 F + StrR.

تردد التحكم السلبي - مرة واحدة في اليوم.

8.5.4.2. طريقة لتأكيد طبيعة الملتهمة للتحلل

في الحالات المشكوك فيها ، عند العمل مع كل من المعايرة والطرق المباشرة ، من الضروري إجراء تلقيح تحكم لتأكيد طبيعة الملتهمة للتحلل.

لهذا الغرض ، يتم استخدام حلقة جرثومية لإزالة جزء من الآجار المشتبه به في القولونية ، ووضعه في 5 مل من مرق المغذيات ، حيث يتم إضافة قطرة من مزرعة اختبار الإشريكية القولونية وحضنها عند 37 درجة مئوية لمدة (16) -18) ساعة ، وتعامل المزرعة الناتجة بالكلوروفورم وتفحص لوجود العاثيات. يتم إجراء البذر باستخدام حلقة أو ماصة على قطاعات أجار المغذيات بنفس الطريقة الموضحة في الفقرة 8.5.2.5. يعتبر التحلل في أي من القطاعات بمثابة تأكيد على وجود العاثية.

باستخدام طريقة تحليل المياه هذه ، يتم تمرير كمية معينة من الماء عبر غشاء خاص بحجم مسام يبلغ حوالي 0.45 ميكرون. نتيجة لذلك ، تبقى جميع البكتيريا الموجودة في الماء على سطح الغشاء. بعد ذلك ، يتم وضع الغشاء الذي يحتوي على البكتيريا لفترة معينة في وسط مغذي خاص عند درجة حرارة 30-37 درجة مئوية. خلال هذه الفترة ، التي تسمى فترة الحضانة ، تتاح للبكتيريا فرصة التكاثر وتشكيل مستعمرات محددة جيدًا يسهل عدها بالفعل. نتيجة لذلك ، يمكنك ملاحظة هذا: أو حتى هذه الصورة:

نظرًا لأن طريقة تحليل المياه هذه تتضمن فقط تحديد العدد الإجمالي للمستعمرات - تكوين البكتيريا أنواع مختلفة، ثم من خلال نتائجه من المستحيل الحكم بشكل لا لبس فيه على وجود الميكروبات المسببة للأمراض في الماء. ومع ذلك ، يشير ارتفاع عدد الميكروبات إلى تلوث بكتيريولوجي عام للمياه واحتمال كبير لوجود الكائنات المسببة للأمراض.

عند تحليل الماء ، من الضروري التحكم ليس فقط في محتوى المواد السامة مواد كيميائية، ولكن أيضًا عدد الكائنات الحية الدقيقة التي تميز التلوث الجرثومي لمياه الشرب ، TMF هو إجمالي عدد الميكروبات. في مياه الإمداد المركزي بالمياه ، يجب ألا يتجاوز هذا الرقم 50 CFU / مل ، وفي الآبار - لا يزيد عن 100 CFU / مل

يتم إجراء البحوث الصحية والميكروبيولوجية للمياه في مخطط
أجل لغرض المراقبة الحالية ، وكذلك لأغراض وبائية خاصة
شهادة كيم. الأهداف الرئيسية لهذا البحث هي:

- مياه الشرب من إمدادات المياه المركزية (مياه الصنبور) ؛

- مياه الشرب من إمدادات المياه غير المركزية ؛

- المياه من مصادر المياه السطحية والجوفية ؛

— مياه الصرف الصحي;

- مياه المناطق الساحلية للبحار ؛

- مياه حمامات السباحة.

المؤشرات الرئيسية لتقييم الحالة الميكروبيولوجية لمياه الشرب وفقًا للوثائق التنظيمية الحالية هي:

1. إجمالي عدد الميكروبات (TMC) - عدد البكتيريا الوسيطة في 1 مل من الماء.

إذا كان العيار- أصغر حجم من الماء (بالمليلتر) يعيش فيه شخص واحد على الأقل
خلية ميكروبية متعلقة بـ BGKP.
مؤشر BGKP- كمية BGKP في 1 لتر من الماء.

3. عدد جراثيم المطثيات الكبريتية المختزلة في 20 مل من الماء.

4. عدد من coliphages في 100 مل من الماء.

يتيح تحديد TMC تقييم مستوى التلوث الميكروبيولوجي لمياه الشرب. هذا المؤشر لا غنى عنه للكشف العاجل عن التلوث الجرثومي الهائل.

إجمالي عدد الميكروبات- هذا هو عدد الكائنات الحية الدقيقة الهوائية اللاهوائية والاختيارية القادرة على تكوين مستعمرات على أجار المغذيات عند درجة حرارة 37 درجة مئوية وفي غضون 24 ساعة ، يمكن رؤيتها عند زيادة مضاعفة.

عند تحديد العدد الإجمالي للميكروبات ، يضاف 1 مل من ماء الاختبار إلى طبق بتري معقم ويتم سكب 10-12 مل من أجار المغذيات الدافئة (44 درجة مئوية). يتم خلط الوسط برفق مع الماء ، بشكل موحد و
بدون توزيع فقاعات الهواء على طول الجزء السفلي من الكأس ، ثم قم بتغطيتها بغطاء واتركها حتى تصلب. تحضن المحاصيل في منظم الحرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. العد حتى المبلغ الإجماليتنمو المستعمرات في كلا الطبقين ، وتحدد متوسط القيمة. يتم التعبير عن النتيجة النهائية بعدد وحدات تشكيل المستعمرة (CFU) في 1 مل من ماء الاختبار. يجب ألا يحتوي 1 مل من مياه الشرب على أكثر من 50 وحدة تشكيل مستعمرة

تعريف BGKP
في الوقت نفسه ، يتم تحديد البكتيريا القولونية الشائعة - OKB والبكتيريا القولونية المقاومة للحرارة - TKB.

GKB عبارة عن قضبان سالبة الجرام وغير بوغية تخمر اللاكتوز إلى حمض وغاز عند 37 درجة مئوية لمدة 24-48 ساعة. TKB من بين OKB ، لديهم علاماتهم ، لكني أتخمر عند 44 درجة مئوية لتحديد البكتيريا المعوية - طريقة المرشحات الغشائية أو المعايرة.

العدد الميكروبي - المعايير الرئيسية لتقييم الحالة الميكروبيولوجية لمياه الشرب ،بناءً على الوثائق التنظيمية الحالية ، هو TMC (العدد الإجمالي للميكروبات) ، والذي يميز عدد البكتيريا الهوائية واللاهوائية في مليلتر واحد من الماء ، والتي تتكون يوميًا عند درجة حرارة 37 درجة ، في وسط مغذي.

مؤشرات جودة مياه الشرب لأنظمة إمدادات المياه.

هذا المؤشر لا غنى عنه تقريبًا للكشف السريع عن التلوث الجرثومي الهائل.

بالنسبة تحديد العدد الإجمالي للميكروباتيضاف مليلتر واحد من ماء الاختبار إلى طبق بتري معقم ، ثم يُسكب 10-15 مل من أجار المغذيات الدافئ (حوالي 44 درجة مئوية) في صورة منصهرة. يتم خلط الوسط بعناية مع الماء ، وتوزيعه بالتساوي وبدون فقاعات هواء فوق قاع الطبق ، ثم يُغلق بغطاء ويترك في طبق بتري حتى يتماسك. نفس الشيء يتم في الكأس الأخرى. يتم تحضين البذر في منظم الحرارة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية خلال النهار. بعد ذلك ، عند التكبير المزدوج تحت المجهر ، يتم حساب العدد الإجمالي للمستعمرات المزروعة في كوبين ، ويتم تحديد القيمة المتوسطة. في 1 مل من مياه الشرب يجب ألا يزيد عن 50 CFU.

(الطريقة الرئيسية)

تعتمد الطريقة على تصفية كمية معينة من الماء (300 مل) من خلال المرشحات الغشائية ، وزراعة المحاصيل على وسط تشخيصي تفاضلي مع اللاكتوز (إندو) ، ثم تحديد المستعمرات من خلال الخصائص الثقافية والكيميائية الحيوية.

توضع المرشحات الغشائية المعدة للتحليل (مسلوقة أو معقمة بطريقة أخرى) بملاقط معقمة في قمع جهاز المرشح. يُسكب حجم مُقاس من الماء في قمع الجهاز ويتم إنشاء فراغ. بعد الترشيح ، يتم إزالة الفلتر ووضعه على سطح وسط المغذيات Endo دون قلب.

يمكن أن يتسع الكوب الواحد لـ 3 مرشحات. في دراسة مياه الشرب ، يتم ترشيح 3 أحجام من 100 مل. عند تحليل المياه ذات الجودة غير المعروفة ، يُنصح بترشيح كميات أخرى من الماء للحصول على مستعمرات معزولة على المرشح (10.40 و 100 و 150 مل).

يتم تحضين أطباق المرشح رأسًا على عقب في حاضنة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة.

إذا لم يكن هناك نمو على المرشحات أو نمت مستعمرات غشائية غير نمطية ، متعفنة ، ضبابية ، فإنها تعطي نتيجة سلبية. OKB و TKB غائبان في 100 مل من الماء المدروس.

مع نمو مستعمرات إيجابية اللاكتوز المعزولة النموذجية (حمراء داكنة مع طبعات على الجانب الخلفي من الفلتر) على المرشحات ، يتم حساب عددها ويبدأون في تأكيد انتمائهم إلى OKB و TKB.

يتم إجراء الفحص المجهري للمسحات من 3-4 مستعمرات ملطخة بالجرام (تؤخذ في الاعتبار المستعمرات سالبة الجرام) ؛

يتم تحديد وجود أوكسيديز (تؤخذ في الاعتبار سالبة أوكسيديز ، لأن قضبان سالبة الجرام إيجابية أوكسيديز لا تنتمي إلى البكتيريا المعوية ، ولكن يمكن أن تكون ، على سبيل المثال ، pseudomonads) ؛

يتم تحديد تخمر اللاكتوز إلى حمض وغاز عند درجة حرارة 37 درجة مئوية ، وهو أمر مهم للمستعمرات الملونة قليلاً وعلاقتها بـ TKB ، وعند درجة حرارة 44 ± 0.5 درجة مئوية ، من أجل تحديد ما إذا كانت تنتمي إلى TKB.

إجراء اختبار أوكسيديز

مبلل على الورق بمحلول كحول 1٪ من α-naphthol و 1٪ محلول مائيثنائي ميثيل فينلين ديامين ، ضع جزءًا من المستعمرة الملونة بحلقة بلاتينية أو قضيب زجاجي. يعتبر التفاعل إيجابيًا إذا ظهر لون أزرق أو أرجواني خلال دقيقة واحدة ، بحد أقصى 4 دقائق. لا تؤخذ المستعمرات إيجابية أوكسيديز في الاعتبار ولا تخضع لمزيد من البحث.

من الممكن نقل المرشح مع المستعمرات إلى الورق المبلل بالكاشف. يمكنك استخدام الأنظمة الورقية الجاهزة (NIBs) المبللة بالماء المقطر.

تم اختبار جزء من مستعمرات البكتيريا سالبة الجرام سالبة أوكسيديز للقدرة على تخمير اللاكتوز. يستخدم هذا الوسط شبه السائل مع اللاكتوز ومؤشر الأس الهيدروجيني. يتم البذر عن طريق الحقن في القاع في أنبوبين اختبار. يتم تحضين أحدهما عند درجة حرارة 37 ± 1 درجة مئوية لمدة 24-48 ساعة لتأكيد العلاقة مع TKB ، والآخر عند درجة حرارة 44 ± 0.5 درجة مئوية لمدة 24 ساعة ، ويمكن التسجيل بعد 4-6 ساعات لتأكيد وجود TKB.

عند تراكب المستعمرات على المرشح ، يتم نخلها ، ثم يتم تحديد المستعمرات المعزولة الناتجة. تحسب المستعمرات على أنها OKB - إذا كانت حمراء في Endo ، فإنها تحتوي على قضبان سالبة الجرام سالبة أوكسيديز تحلل اللاكتوز عند درجة حرارة 37 درجة مئوية إلى حمض وغاز. تحسب المستعمرات على أنها TKB إذا كانت تحتوي على قضبان سالبة الجرام سالبة أوكسيديز تخمر اللاكتوز عند درجة حرارة 44 درجة مئوية إلى حمض وغاز (مخطط رقم 2).

مخطط № 2

تاريخ النشر: 2014-11-02. قراءة: 1811 | انتهاك حقوق النشر الصفحة

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018. (0.001 ثانية) ...

إجمالي عدد الميكروبات

نظرًا لأن طريقة تحليل المياه هذه تتضمن فقط تحديد العدد الإجمالي للبكتيريا المكونة للمستعمرات من أنواع مختلفة ، فإن نتائجها لا يمكن أن تحكم بشكل لا لبس فيه على وجود الميكروبات المسببة للأمراض في الماء. ومع ذلك ، يشير ارتفاع عدد الميكروبات إلى تلوث بكتيريولوجي عام للمياه واحتمال كبير لوجود الكائنات المسببة للأمراض.

عند تحليل المياه ، من الضروري التحكم ليس فقط في محتوى المواد الكيميائية السامة ، ولكن أيضًا في عدد الكائنات الحية الدقيقة التي تميز التلوث الجرثومي لمياه الشرب. TMF هو إجمالي عدد الميكروبات. في مياه الإمداد المركزي بالمياه ، يجب أن يكون هذا الرقم لا تتجاوز 50 CFU / مل ، وفي الآبار والآبار - لا تزيد عن 100 cfu / ml

- مياه الشرب من إمدادات المياه المركزية (مياه الصنبور) ؛

- مياه الشرب من إمدادات المياه غير المركزية ؛

- المياه من مصادر المياه السطحية والجوفية ؛

- مياه الصرف الصحي؛

- مياه المناطق الساحلية للبحار ؛

- مياه حمامات السباحة.

المؤشرات الرئيسية لتقييم الحالة الميكروبيولوجية لمياه الشرب وفقًا للوثائق التنظيمية الحالية هي:

1. إجمالي عدد الميكروبات (TMC) - عدد البكتيريا الوسيطة في 1 مل من الماء.

3. عدد جراثيم المطثيات الكبريتية المختزلة في 20 مل من الماء.

4. عدد من coliphages في 100 مل من الماء.

عند تحديد العدد الإجمالي للميكروبات ، يضاف 1 مل من ماء الاختبار إلى طبق بتري معقم ويتم سكب 10-12 مل من أجار المغذيات الدافئة (44 درجة مئوية). يتم خلط الوسط برفق مع الماء ، بشكل موحد و
بدون توزيع فقاعات الهواء على طول الجزء السفلي من الكأس ، ثم قم بتغطيتها بغطاء واتركها حتى تصلب. تحضن المحاصيل في منظم الحرارة عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. احسب العدد الإجمالي للمستعمرات المزروعة في كلا الطبقين وحدد متوسط القيمة. يتم التعبير عن النتيجة النهائية بعدد وحدات تشكيل المستعمرة (CFU) في 1 مل من ماء الاختبار. يجب ألا يحتوي 1 مل من مياه الشرب على أكثر من 50 وحدة تشكيل مستعمرة

مبادئ ترشيد مياه الشرب

نفس الشيء يتم في الكأس الأخرى. يتم تحضين البذر في منظم الحرارة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية خلال النهار. بعد ذلك ، عند التكبير المزدوج تحت المجهر ، يتم حساب العدد الإجمالي للمستعمرات المزروعة في كوبين ، ويتم تحديد القيمة المتوسطة. في 1 مل من مياه الشرب يجب ألا يزيد عن 50 CFU.

OKB هو مؤهل دولي ويتم تضمينهم في مجموعة كبيرة BGKP (بكتيريا من مجموعة الإشريكية القولونية). يمكن تحديد محتوى OKB في الماء بطريقتين: طريقة المرشحات الغشائية وطريقة المعايرة (التخمير).

فحص المياه بطريقة المرشحات الغشائية. تعتمد الطريقة على ترشيح حجم معين من المياه من خلال المرشحات الغشائية ، وزراعة المحاصيل على وسط تشخيصي تفاضلي ، والتعرف اللاحق على المستعمرات من خلال الخصائص الثقافية والكيميائية الحيوية.

طريقة المعايرة لدراسة الماء. تعتمد الطريقة على تراكم البكتيريا بعد تلقيح كمية محددة من الماء في وسط مغذي سائل ، متبوعًا بإعادة التلقيح على وسيط تشخيصي تفاضلي وتحديد المستعمرات عن طريق اختبارات ثقافية وكيميائية حيوية.
تنتمي "الكائنات القولونية" إلى فئة من البكتيريا سالبة الجرام ، على شكل قضيب تعيش وتتكاثر في أسفل البطن. الجهاز الهضميالإنسان والعديد من الحيوانات ذوات الدم الحار مثل - الماشيةوالطيور المائية ، قادرة على تخمير اللاكتوز عند 35-37 درجة مئوية مع تكوين الحمض والغاز والألدهيد. وبمجرد دخولهم المياه مع الفضلات السائلة البرازية ، يمكنهم البقاء على قيد الحياة لعدة أسابيع ، على الرغم من أن الغالبية العظمى منهم يفتقرون إلى القدرة على التكاثر.

وفقًا للدراسات الحديثة ، إلى جانب بكتيريا Escherichia (E.Coli) و Citrobacter و Enterobacter و Klebsiela التي تُنسب عادةً إلى هذه الفئة ، تنتمي بكتيريا Enterobacter cloasae و Citrobadter freundii القادرة على تخمير اللاكتوز أيضًا إلى هذه الفئة. يمكن العثور على هذه البكتيريا ليس فقط في البراز ، ولكن أيضًا في البيئة ، وحتى في مياه الشرب التي تحتوي على نسبة عالية نسبيًا من العناصر الغذائية. بالإضافة إلى ذلك ، يشمل هذا الأنواع التي نادرًا ما توجد في البراز أو لا توجد وقادرة على التكاثر في المياه ذات النوعية الجيدة إلى حد ما.

TKB - البكتيريا القولونية المقاومة للحرارة. يحدد عدد TCB درجة التلوث البرازي للمياه في المسطحات المائية ويحدد بشكل غير مباشر الخطر الوبائي فيما يتعلق بمسببات الأمراض المعدية المعوية. يتم تحديد TKB بنفس طرق BGKP (OKB).
يجب أن يتم أخذ العينات للدراسات الصحية والميكروبيولوجية وفقًا لقواعد العقم وجميع الشروط اللازمة المنظمة لكل كائن قيد الدراسة من خلال الوثائق التنظيمية ذات الصلة.

أخطاء أخذ العينات تؤدي إلى نتائج غير صحيحة. عند تعبئة العينات ونقلها ، من الضروري تهيئة الظروف التي تستبعد موت أو تكاثر الكائنات الحية الدقيقة الأصلية في الكائن قيد الدراسة. لذلك ، يجب تسليم العينات التي تم جمعها إلى المختبر لتحليلها في أسرع وقت ممكن.