İçme suyunda okb tkb tayini. Suyun mikrobiyolojik çalışmaları

İçme ve evsel ihtiyaçlar için su kalitesi için hijyenik gereklilikler, insan sağlığının ve yaşam koşullarının bağlı olduğu su kalitesine odaklanan ilkeye dayanmaktadır. Modern sıhhi mevzuata göre içme suyu salgın ve radyasyon açısından güvenli, sağlık açısından zararsız olmalıdır. kimyasal bileşim ve uygun organoleptik özelliklere sahiptir.

İçme suyunun salgın açısından güvenliği, mikrobiyolojik gösterge standartlarına uygunluğu ile belirlenir. İçme suyunun mikrobiyolojik bileşimi, kalitesinin ve tüketime uygunluğunun ana göstergesidir. Bu, hem bakteriyel hem de viral kontaminasyonu hesaba katar.

SanPiN'de içme suyunun epidemiyolojik güvenliği çeşitli göstergelerle değerlendirilir. Dışkı kirliliğinin ve toplam koliformların gerçek göstergeleri olarak termotolerant koliformlara aralarında büyük bir rol verilir.

Yaygın koliform bakterileri (CBC), diferansiyel laktoz ortamlarında gelişebilen, +37°C sıcaklıkta 24-48 saat boyunca laktozu asit ve gaza fermente edebilen gram-negatif, oksidaz-negatif, spor oluşturmayan çubuklardır.

Termotolerant koliform bakteriler (TCB), OKB'nin bir parçasıdır ve tüm özelliklerine sahiptir, ancak onlardan farklı olarak, +44 sıcaklıkta 24 saat boyunca laktozu asit, aldehit ve gaza fermente edebilirler. Bu nedenle, TKB, laktozu daha yüksek bir sıcaklıkta asit ve gaza fermente etme kabiliyeti bakımından OKB'den farklıdır. 100 ml içme suyunda termotolerant ve yaygın koliformlar bulunmamalıdır (analizin üç kat tekrarı olan numunelerin herhangi birinde).

Büyük merkezi içme suyu tedarik sistemlerinin dağıtım ağında (yılda en az 100 çalışılan numune sayısı ile), ortak koliformlar için standart olmayan numunelerin %5'ine izin verilir, ancak bir noktada alınan iki ardışık numuneye izin verilmez.

Toplam mikroorganizma sayısı (toplam mikrobiyal sayı - TMC), 37°C'lik bir kuluçka sıcaklığında et-pepton agar üzerinde büyüme ile belirlenir. Bu gösterge, içme suyu arıtma verimliliğini karakterize etmek için kullanılır, su kalitesini izlerken dikkate alınmalıdır. dinamikler. Standart değerin sınırları dahilinde bile (ancak 1 ml'de 50'den fazla olmayan) TMF'nin keskin bir sapması, su arıtma teknolojisinde bir ihlal sinyali olarak hizmet eder. Dağıtım şebekesinin suyunda TMP'nin büyümesi, kirli yeraltı suyunun emilmesini gerektiren organik maddelerin birikmesi veya sızıntı nedeniyle mikroorganizmaların çoğalmasına katkıda bulunan olumsuz sıhhi durumunu gösterebilir.

Aerobik saprofitler sadece bir parçasıdır toplam sayısı sudaki mikroplar, ancak kirlilik derecesi arasında olduğu için su kalitesinin önemli bir sıhhi göstergesidir. organik madde ve mikrobiyal sayı arasında doğrudan bir ilişki vardır. Ek olarak, toplam mikrobiyal sayı ne kadar yüksekse, suda patojenik mikroorganizmaların bulunma olasılığının o kadar yüksek olduğuna inanılmaktadır. Musluk suyundaki mikrobiyal sayı 100'ü geçmemelidir.

İçme suyunun salgın anlamda güvenliği, mikrobiyolojik gösterge standartlarına uygunluğu ile belirlenir (Tablo 1).

Tablo 1. İçme suyunun mikrobiyolojik göstergeleri

Sıhhi gösterge mikroorganizmaları kavramı

Sıhhi gösterge mikroorganizmalar için temel gereksinimler: 1. Patojenik mikroorganizmalarla ortak bir doğal yaşam ortamına sahip olmalı ve dış ortama bir süre içinde salınmalıdırlar. çok sayıda; 2. içinde dış ortam Habitatlar, sıhhi gösterge mikroorganizmalar mümkün olduğunca eşit olarak dağıtılmalı ve patojenik olanlardan daha dirençli olmalıdır. Suda daha uzun süre kalmalı, pratik olarak çoğalmamalı, çeşitli olumsuz etkenlere karşı daha dayanıklı olmalı, özellik ve özelliklerde daha az değişkenlik göstermeli; 3. Hijyenik gösterge mikroorganizmaları belirleme yöntemleri basit olmalı ve yeterli derecede güvenilir olmalıdır.

Sıhhi mikrobiyoloji açısından, sıhhi ve epidemiyolojik tehlikesini veya güvenliğini belirlemek için su kalitesi değerlendirmesi yapılır. İnsan sağlığı için. su oyunları önemli rol başta bağırsak olmak üzere birçok enfeksiyonun patojenlerinin bulaşmasında.

Türlerinin çeşitliliği ve analizin karmaşıklığı nedeniyle, su kalitesi kontrolü için tüm enfeksiyonların doğrudan nicel olarak belirlenmesi mümkün değildir.

İçinde tifo, paratifo A, paratifo B, dizanteri, bulaşıcı sarılık, su humması ve tularemi patojenlerinin olası varlığı için sadece bir su örneğinin analizi, büyük bir bakteriyoloji laboratuvarının tüm personelini bile tamamen yükleyecektir. Ayrıca bu durumda cevap ancak 2-3 hafta sonra verilecektir, yani. nüfus, çalışılan suyu uzun süre içtiğinde.

Su güvenliğinin ayrıntılı bir tanımının bariz uygunsuzluğu göz önüne alındığında, geç XIX Yüzyıllar boyunca, suda yaşayan tüm patojenik mikropların araştırılmasını, patojenik olmasa da, insan dışkısında sürekli olarak bulunan tek bir mikropla değiştirmek için girişimlerde bulunulmuştur. O zaman, incelenen su gerçekten dışkı ile kontamine olmuşsa, sağlıklı nüfus arasında hem hasta hem de basil taşıyıcıları bulunabileceğinden, içmek için tehlikeli olabileceği düşünülebilir. Fekal kontaminasyonun bu tür bakteriyolojik göstergelerinin araştırılması başarılı olmuştur. İnsan dışkısında aşağıdaki mikroplardan üçünün sürekli olarak bulunduğu ortaya çıktı: 1) Escherichia coli; 2) enterokoklar; 3) anaerobik spor oluşturan bakteriler, özellikle Bac. perfingens.

Bu nedenle evsel atık sularda E. coli baskındır. Ama sadece o değil daha fazla içerik. Fekal kontaminasyonun bakteriyel bir göstergesinin ana değeri, ölüm hızının çoğu patojenik mikrop olduğu gerçeğinde yatmaktadır. Ancak bu koşul sağlanırsa, insan dışkısında sürekli olarak bulunan bir mikrop, dışkı kontaminasyonunun bir göstergesi olacaktır.

Bağırsakların keşfedilen kalıcı sakinlerine bu açıdan yaklaşırsak, şunları buluruz: Bac grubunun mikropları. perfingens suda patojenik mikroplardan çok daha uzun süre kalır; enterokoklar, aksine, çok daha erken ölür; Escherichia coli'ye gelince, suda kalma süresi yaklaşık olarak patojenik mikropların hayatta kalma süresine karşılık gelir.

Bu nedenle, suyun ana sıhhi-bakteriyolojik göstergesi Escherichia coli'dir. Sadece dünyadaki tek ülke olan Rusya'da su kalitesi Escherichia coli grubunun (BGKP indeksi) bakterisi tarafından kontrol edilmektedir. Bu grup, bağırsak bakterileri grubunun tüm temsilcilerini ve fırsatçı temsilcileri içerir.

GOST 2874-73 ve GOST 18963-73'e göre, Escherichia coli grubunun (EKG) bakterileri, laktozu veya glikozu 24 saat içinde 37°C'de asit ve gaza fermente eden Gram-negatif, spor oluşturmayan basilleri içerir. oksidaz aktivitesine sahiptir. CGB'ler çeşitli cinslerin temsilcilerini içerir - Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, ancak hepsi insan ve hayvanların bağırsaklarından çevreye salınır. Bu sebeple onların keşfi çevre fekal kontaminasyonun bir göstergesi olarak kabul edilmelidir.

BGKP'ye dahil edilen cinslerden Escherichia cinsi en sıhhi ve gösterge değerine sahiptir. Ortamdaki tüm bu bakterilerin varlığı, taze fekal kontaminasyon olarak kabul edilir.

Escherichia - insan ve hayvanların bağırsaklarının arka plan türlerinden biridir. E. coli türü de dahil olmak üzere Escherichia cinsi, taze fekal kontaminasyonun göstergesi, makul sebep toksik enfeksiyonlar Sudaki cinsin temsilcileri, termotolerant koliform bakteriler olarak kabul edilir.

Citrobacter - atık su, toprak ve diğer çevresel nesnelerin yanı sıra sağlıklı ve AII hastaların dışkılarında yaşar. Fırsatçı bakteri grubuna aittirler. (Mikrobiyolojik sözlük-başvuru kitabı, 1999)

Citrobacter'in SPMO olarak dezavantajları şunları içerir:

1. dış ortamda çok sayıda analog.

2. dış ortamdaki değişkenlik.

3. Olumsuz etkilere karşı yetersiz direnç.

4. Suda üreme yeteneği.

5. Salmonella varlığı için bile bulanık gösterge.

Araştırma son yıllar patojenik bakterilerin varlığı ile sudaki göstergeler arasında doğrudan bir ilişki olmadığını ortaya çıkardı. üzerinde yoğun antropojenik baskı olan bölgelerde su kütleleri potansiyel patojenik ve patojenik bakterilerin kantitatif baskınlığının arka planına karşı biyolojik ve kültürel özelliklerinde bir değişiklik ile gösterge mikroorganizmaların içeriğinde bir azalma oldu.

Enterobacter - insanların ve diğer hayvanların bağırsaklarında yaşar, toprakta, suda bulunur, Gıda Ürünleri, bağırsak, ürogenital, solunum, cerahatli iltihaplı insan hastalıkları için çağrı.

Klebsiella - insanların, memelilerin, kuşların su, toprak, gıda, bağırsak ve solunum yollarında yaşar.

1910 yılında SPMO'nun rolü için enterokoklar (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium) önerilmiştir.

Enterokoklar, fakültatif anaerobik asporojenik kemoorganotrofik Gram+ bakterilerin bir cinsidir. Hücreler polimorfiktir. Doğada yaygın olarak dağıtılır. İnsanların, memelilerin, kuşların bağırsaklarının arka plan türlerinden biridir. Genellikle perine ve genital sistem, burun boşlukları, farenks, burun derisinin florasında bulunur. Toprakta uzun süre hayatta kalır, gıda ürünleri.

Enterococcus'un SPMO Olarak Faydaları:

1. Sürekli olarak insan bağırsağında bulunur ve sürekli olarak dış ortama salınır. Aynı zamanda, Enterococcus faecalis esas olarak insan bağırsağında yaşar, bu nedenle tespiti insan dışkısı ile kontaminasyonu gösterir. Daha az ölçüde, Enterococcus faecium insanlarda görülür. Sonuncusu esas olarak hayvanların bağırsaklarında bulunur, ancak Enterococcus faecalis de nispeten nadirdir.

2. Dış ortamda üreyemez, Enterococcus faecium esas olarak ürer, ancak epidemiyolojik önemi daha azdır.

3. Dış ortamda özelliklerini değiştirmez.

4. Dış ortamda analogları yoktur.

5. Olumsuz çevresel etkilere karşı dayanıklıdır. Enterococcus, klora Escherichia coli'den 4 kat daha dayanıklıdır. Bu onun ana değeridir. Bu özellik nedeniyle enterokok, su klorlama kalitesinin yanı sıra dezenfeksiyon kalitesinin bir göstergesini kontrol etmek için kullanılır. Pastörizasyon kalitesinin bir göstergesi olarak kullanılmasına izin veren 60 ° C sıcaklığa dayanır. %6.5-17'lik ortak tuz konsantrasyonlarına dayanıklıdır. 3-12 aralığında pH'a dayanıklıdır.

6. Enterokok endikasyonu için oldukça seçici besiyerleri geliştirilmiştir. Enterococcus'un sudaki hayatta kalma oranı, patojenik Enterobacteriaceae'ninkine yakındır. Enterococcus, haklı olarak, içme suyu çalışmasında E. coli'den sonra ikinci sıhhi gösterge testidir.

Şu anda enterokokometri, taze fekal kontaminasyonun bir göstergesi olarak uluslararası su standardında yasallaştırılmıştır. Suda atipik Escherichia coli bulunduğunda, enterokokların varlığı taze fekal kontaminasyonun ana göstergesi olur. Ne yazık ki SanPiN 2.1.4.1074-01'de içme suyu için enterokok tanımı yapılmamıştır.

Proteus grubu, doğada çürütücü süreçlerin suçlusu olarak kabul edilir ve bu nedenle rezervuarların suyunda organik maddelerin varlığının göstergesi olarak kabul edilir. Bu esas olarak bir tür için geçerlidir - Pr. vulgaris; ikinci tür - Pr.mirabilis - insan ve hayvanların bağırsaklarının bir sakinidir. Bu ekolojik farklılık, su kirliliğinin doğasını ve salgın güvenliğinin derecesini değerlendirmeyi mümkün kıldı. Pr.vulgaris dışkı kirliliğinin bir göstergesi olabilir, Pr.vulgaris - genel olarak organik madde konsantrasyonundaki artışın bir göstergesi olabilir. Zayıf taraflar bu gösterge, insan bağırsağında aralıklı olarak Pr.mirabilis varlığı ve her iki türün de suda oldukça yoğun üreme yeteneğidir. Ayrıca, test örneğinde aynı anda var olduklarında her iki türün farklı şekilde dikkate alınmasına izin verecek bir araştırma yöntemi de yoktur. Önerilen yöntem bu görevi yerine getirmiyor.

Proteus cinsine ait bakterilerin vakaların %98'inde insan ve hayvanların bağırsaklarının salgılarında bulunduğu ve vakaların %82'sinin Pr.mirabilis olduğu gösterilmiştir. sudaki proteusun tespiti, nesnenin çürüyen substratlarla kontaminasyonunu gösterir ve aşırı sıhhi sorunları gösterir. Proteometri ABD'de resmi olarak tanınmaktadır.

Sülfür indirgeyen clostridia sporlarının tanımlanması, su borularında yapılır. yüzey kaynakları teknolojik su arıtmanın etkinliğini değerlendirmek. Su arıtımı tamamlandıktan sonra 20 ml içme suyunda sülfit indirgeyen bakteri sporları bulunmamalıdır.

İçme suyunun viral kontaminasyonunun bir göstergesi olarak SanPiN, biyolojik kökenleri, boyutları, özellikleri ve çevresel faktörlere karşı dirençleri açısından bağırsak virüslerine en yakın olan kolifajları içerir. 100 ml arıtılmış içme suyunda kolifaj tespit edilmemelidir.

İçme suyu

Suyun yanı sıra kimyasal uyumsuzluğu onu içilmez yapar. Su kaynağınız aşağıdakilerden korunmuyorsa doğrudan etkiçevre veya yardımcı sistemler eskiyse veya uzun süredir temizlenmemişse, mikrobiyolojik bir test yapmak basitçe gereklidir. Sağlığınız ve güvenliğiniz buna bağlı! Bu özellikle kuyuyu kullananlar için önemlidir. - toprak, doğrudan toprakla temas eder, yani sizi nitratlar, ağır metaller, amonyak ve tabii ki tarımsal çiftliklerin veya arazilerin faaliyetleri sonucunda toprağa giren zararlı organik maddelerle “içmek”le tehdit eder.

Tablo 1, içme suyu için mevcut SanPiN 2.1.4.1074-01 standardının mikrobiyolojik göstergelerini göstermektedir:

Tablo 1. İçme suyu için mikrobiyolojik standartlar

Standart mikrobiyolojik analiz

Moskova Devlet Üniversitesi'ndeki içme suyunun standart mikrobiyolojik analizi, üç göstergenin belirlenmesini içerir: toplam mikrobiyal sayı, toplam koliform sayısı ve ısıya dayanıklı koliform bakteri sayısı.

Gelişmiş mikrobiyolojik analiz

Suyun kapsamlı bir mikrobiyolojik analizi, beş göstergenin analizini içerir: toplam mikrobiyal sayı, toplam koliform bakteri sayısı, ısıya dayanıklı koliform bakteri sayısı, kolifaj titresi ve sülfit azaltan bakteri sporlarının içeriği.

Yüzey suyu kütlelerinin (göletler, nehirler, havuzlar) mikrobiyolojik analizi

Çoğu zaman sahalarımızda veya yakınlarda, bizim ve çocuklarımızın keyifle vakit geçirmeyi sevdiğimiz su kütleleri vardır. Tabii ki, bu rezervuarlardaki su içilebilir değildir, ancak insanlar için olduğu kadar içme için de güvenliği düzenlenmiştir. Tablo 2, mevcut standardın mikrobiyolojik göstergelerini sunar. hijyen gereksinimleri korumaya yüzey suyu(SanPiN 2.1.5.980-00)

Tablo 2. Rekreasyonel su kullanımının yanı sıra nüfuslu alanların sınırları içinde mikrobiyolojik standartlar

Standart mikrobiyolojik analiz (yüzey suları)

İçme amaçlı olmayan suyun mikrobiyolojik analizi, iki göstergenin sayısının belirlenmesini içerir: toplam koliform ve koliform ısıya dayanıklı bakteriler.

Gelişmiş mikrobiyolojik analiz (yüzey suları):

İki ana göstergeye ek olarak, aşağıdakilerin içeriği için ek bir analiz yapmayı öneriyoruz: kolifajlar, fırsatçı mayalar ve mikromisetler (fırsatçı hastalıkların sık uyduları) ve rezervuarın kendi kendini temizleme indeksi.

Salmonella cinsi ve Enterococcus cinsine ait bakterilerin belirlenmesi

SanPiN 2.1.5.980-00 standartlarının önemli bir fazlasının yanı sıra rezervuarın olası fekal kontaminasyonu ile patojenlerin varlığı için bir analiz yapmayı öneriyoruz. bağırsak enfeksiyonları(Salmonella ve Enterococcus cinsi).

Sözlük

Toplam Mikrobiyal Bolluk (TMC)

Yöntem tanımlar içme suyu 2 kat artışla görülebilen, 37 °C'de 24 saat boyunca besleyici agar üzerinde kolonize edebilen mezofilik aerobik ve fakültatif anaerobik mikroorganizmaların (FMA) toplam sayısı. Bu gösterge, insan sağlığına zarar verebilecek potansiyel bakterileri tanımlar.

Ortak koliform bakterileri (TCB)

Yaygın koliform bakterileri (CBC), (37 + 1) ° C sıcaklıkta diferansiyel laktoz ortamlarında büyüyebilen, laktozu aside, aldehit ve gaza fermente edebilen gram negatif, oksidaz negatif, spor oluşturmayan çubuklardır ( 24-48) saat. Bu grubun birçok üyesi mikroorganizmalardır. normal mikroflora mide, bu nedenle, bu mikroorganizma grubunun fazlalığı, olası antropojenik (dışkı dahil) su kirliliğini gösterebilir.

Termotolerant koliform bakteri (TCB)

Termotolerant koliform bakteriler (TCB) yaygın koliform bakteriler arasındadır, tüm özelliklerine sahiptir ve ayrıca (44 ± 0,5) °C sıcaklıkta 24 saat boyunca laktozu asit, aldehit ve gaza fermente edebilmektedir. OKB'nin yanı sıra bir gösterge grubudurlar, ancak çevrede daha kararlıdırlar: bu nedenle suda bu mikroorganizma grubunun tespiti, insan atık ürünleri ile açık bir şekilde kontamine olduğunu gösterebilir.

kolifajlar

Standart yöntemle (MUK 4.2.1018-01) belirlenen kolifajlar, E. coli virüsleridir (Escherichia coli) ve epidemiyologlar tarafından E. coli mikroorganizmaları tarafından su kirliliğinin belirlenmesinde ek ve bazen daha hassas bir yöntem olarak kabul edilir. koli grubu. Virüs parçacıkları ve özellikle kolifajlar, çevreye karşı konakçı bakterilerden daha dirençlidir. Bu bağlamda, kolifajların varlığı, su kaynağının eski fekal kontaminasyonunun güvenilir bir göstergesi olarak hizmet edebilir. Sudaki kolifajların içeriği ile insanlar için tehlikeli enterovirüsler arasında doğrudan bir ilişki gösterildi, bu nedenle sudaki kolifajların varlığı, kaynağın viral bir enfeksiyonunu gösterebilir. Mevcut düzenleyici belge (SanPiN 2.1.4.1074-01), 100 ml su içinde kolifajların bulunmadığını ima eder.

Sülfit indirgeyen clostridia sporları

Sülfit indirgeyen clostridia, bir rezervuarın fekal kirliliğinin ek bir mikrobiyolojik göstergesi olan spor oluşturan anaerobik çubuk şekilli mikroorganizmalardır. Nispeten kararsız koliform ve ısıya dayanıklı koliform bakterilerinin aksine, Clostridial sporları su kütlelerinde yaşayabilir. uzun zaman. Clostridia, insanların ve evcil hayvanların bağırsaklarında bulunur, ancak çok miktarda su ile yutulursa gıda zehirlenmesine neden olabilir. Sülfit azaltan clostridia, ciddi hastalıklara neden olan insanlar için tehlikeli olan clostridium'u (Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani) içerir. Mevcut standarda göre (SanPiN 2.1.4.1074-01), Clostridia sporları 20 ml suda bulunmamalıdır.

Fırsatçı mayalar ve mikromisetler

Şartlı patojenik mayalar ve mikromisetler (küfler), 37 °C'de saprotrofik olarak büyüyebilen büyük bir heterojen mantar organizmaları grubunu içerir. İnsan fırsatçı hastalıklarında sık görülen ve kandidiyaza neden olan Candida albicans ve Cryptococcus neoformans gibi temsilcileri içerir. mantar hastalıkları cilt), pamukçuk vb. Diğer mikromiset organizmaları (Cladosporium cladosporioides, Aspergillusniger) alerjik reaksiyonların aktif duyarlılaştırıcıları ve bazen de alerjenlerin kendileri olabilir. Rusya Federasyonu'nda su, sudaki küf ve maya organizmaları için standardize edilmemiştir.

Kendi kendini temizleme indeksinin belirlenmesi (MUK 4.2.1884-04'ten itibaren)

Rekreasyon alanlarındaki rezervuarların sularındaki toplam mikroorganizma sayısı standardize edilmemiştir, çünkü bu mikroorganizma grubunun seviyesi büyük ölçüde bağlıdır. doğal özellikler her nesne, mevsim vb.

Bununla birlikte, yeni bir su kaynağı kaynağı veya rezervuarların suyunda bir rekreasyon yeri seçerken, ayrıca büyüyen toplam mikrobiyal popülasyonu belirlemek gerekir:

24 saat 37 ° C sıcaklıkta;
22°C'de 72 saat.

Şu varsayılmaktadır:

37 °C'de TMC sunulur çoğu kısım için alokton mikroflora (dışkı kirliliği de dahil olmak üzere antropojenik kirliliğin bir sonucu olarak rezervuara verilir);
20-22 °C'de TMP, alokton, aborjin mikroflorasına (doğal, bu rezervuarın özelliği) ek olarak temsil edilir.

Bu mikroorganizma gruplarının sayılarının oranı, kendi kendini temizleme sürecinin yoğunluğunu değerlendirmeyi mümkün kılar. Kendi kendini temizleme işleminin sonunda OMC katsayısı 22°C / OMC 37°C'dir. Evsel atık su kirliliği olan yerlerde, her iki grubun sayısal değerleri yakındır.

Gösterge şunları almanızı sağlar: Ek bilgi su kütlelerinin sıhhi durumu, kirlilik kaynakları, kendi kendini temizleme süreçleri hakkında.

8.1. Besleyici agar üzerinde koloni oluşturan toplam mikroorganizma sayısının belirlenmesi

8.1.1. Gösterge kavramının tanımı

Yöntem, içme suyunda, 2 kat artışla görülebilen, 37 °C sıcaklıkta 24 saat boyunca besleyici agar üzerinde koloniler oluşturabilen mezofilik aerobik ve fakültatif anaerobik mikroorganizmaların (FMC) toplam sayısını belirler.

8.1.2. Analiz yapmak

Her numuneden en az iki hacim 1 ml aşılanır.

İyice karıştırıldıktan sonra, kapakları hafifçe açılarak steril Petri kaplarına 1 ml su örnekleri eklenir. Su ilave edildikten sonra (8-12) ml (90-100 mm çapında bir bardağa) erimiş ve (45-49 °C) ye soğutulmuş nütrient agar her bir bardağa döküldükten sonra tabağın kenarını ateşe verdikten sonra. hangi içerdiği. Ardından, kapların içindekileri, tüm tabana eşit olarak dağıtarak, hava kabarcıklarının oluşmasını, kabın kenarlarında ve kapağında agar oluşmasını önleyerek hızla karıştırın. Bu prosedür, agar katılaşana kadar plakaların bırakıldığı yatay bir yüzey üzerinde gerçekleştirilir.

Analiz periyodu için erimiş agar, bir su banyosuna veya (45-49) °C'lik bir sıcaklığı koruyan bir termostata yerleştirilir.

Agar katılaştıktan sonra kültürlü plakalar bir termostata baş aşağı yerleştirilir ve (37 ± 1)°C sıcaklıkta (24 ± 2) saat inkübe edilir.

8.1.3. Eşit sonuçlar

2 kat büyütmede gözlemlenen, plaka üzerinde büyütülen tüm koloniler sayılır. Yalnızca 300'den fazla izole koloninin üremediği yemekler dikkate alınır.

Her iki plakadaki koloni sayısı toplanır ve ikiye bölünür. Sonuç, 1 ml test suyu örneğindeki koloni oluşturan birimlerin (CFU) sayısı olarak ifade edilir.

2 plakadan birinde sayım mümkün değilse, sonuç bir plakadaki koloni sayısına göre verilir. İki plaka, plakanın tüm yüzeyini kaplamayan yaygın koloni büyümesi gösteriyorsa veya 300'den fazla koloni büyümüşse ve tahlil tekrar edilemiyorsa, çanağın sektörünü sayın ve ardından tüm yüzeyi yeniden hesaplayın. Bu durumlarda, protokol “CFU / ml sayısını - yaklaşık olarak” not eder.

Plakalarda koloni sayımı mümkün değilse, protokole “sürekli büyüme” kaydedin.

8.2. Membran filtrasyonu ile yaygın ve ısıya dayanıklı koliform bakterilerinin belirlenmesi (ana yöntem)

8.2.1. Gösterge kavramının tanımı

Yaygın koliform bakterileri (CBC), (37 ± 1) °C sıcaklıkta (24-) için laktozu asit, aldehit ve gaza fermente edebilen, diferansiyel laktoz ortamlarında büyüyebilen, gram-negatif, oksidaz-negatif, sporsuz çubuklardır. 48) h.

Termotolerant koliform bakteriler (TCB) yaygın koliform bakteriler arasındadır, tüm özelliklerine sahiptir ve ayrıca laktozu (44 ± 0,5) °C sıcaklıkta 24 saat süreyle asit, aldehit ve gaza fermente edebilmektedir.

8.2.2. Yöntem ilkesi

Yöntem, belirli bir hacimdeki suyun membran filtrelerden süzülmesine, ekinlerin laktozlu farklı bir besin ortamında yetiştirilmesine ve ardından kolonilerin kültürel ve biyokimyasal özelliklere göre tanımlanmasına dayanır.

8.2.3. Analiz yapmak

8.2.3.1. Araştırma sırası

İçme suyu çalışmasında 3 hacim 100 ml analiz edilir.

Kararlı negatif sonuçlar elde edilirse, bir filtreden 300 ml su süzülebilir.

Bilinmeyen kalitede su filtrelenirken, filtrede izole koloniler elde etmek için filtrelenen hacimlerin sayısının arttırılması tavsiye edilir (örneğin, 10, 40, 100, 150 ml su).

Ölçülen su hacmi, 7. paragrafta belirtilen gerekliliklere uygun olarak membran filtrelerden süzülür.

Filtreler, paragraf 5.4'e göre hazırlanan Endo ortamına yerleştirilir. Filtreli kaplar baş aşağı bir termostata yerleştirilir ve (37 ± 1) °C sıcaklıkta (24 ± 2) saat inkübe edilir.

Filtrelerde üreme yoksa veya koloniler zarlı, süngerimsi, küflü, şeffaf, belirsiz ise olumsuz cevap verirler: 100 ml test suyunda OKB ve TKB yok. Analiz 24 saat sonra tamamlanır.

Filtrelerde izole edilmiş tipik laktoz-pozitif kolonilerin büyümesi tespit edilirse: koyu kırmızı, metalik parlaklığa sahip olan veya olmayan kırmızı veya üzerinde damga bulunan diğer benzer türde koloniler. ters taraf filtreleyin, her bir türün koloni sayısını ayrı ayrı sayın ve OKB ve TKB'ye ait olduklarını doğrulamaya devam edin.

OKB'nin varlığını doğrulamak için şunları inceleyin:

Filtrelerde 5'ten az koloni büyümüşse tüm koloniler;

Her türden en az 3-4 koloni.

TKB'nin varlığını doğrulamak için tüm tipik koloniler incelenir, ancak 10'dan fazla değildir.

Seçilen her izole koloni aşağıdakiler için incelenir:

Oksidaz aktivitesinin varlığı;

Gram bağlantısı (Gram lekeli bir preparatın mikroskopisi veya Gregersen testi);

Laktozun asit ve gaza fermantasyonu.

8.2.3.2. Oksidaz testinin ayarlanması

Temiz bir Petri kabına bir filtre kağıdı şeridi yerleştirilir ve paragraf 5.7'ye göre 2-3 damla oksidaz test reaktifi ile nemlendirilir. Bitmiş kağıt sistemleri damıtılmış su ile nemlendirilir. İzole edilmiş koloninin bir cam klasör veya platin halka (nikrom metal halka yanlış pozitif reaksiyon verebilir) ile bir kısmı hazırlanan filtre kağıdına sürtünerek uygulanır. 1 dakika içinde inme mor-kahverengi (bölüm 5.7.1 seçenek 1) veya mavi (bölüm 5.7.2 seçenek 2 ve NIB oksidaz) boyanırsa reaksiyon pozitif olarak kabul edilir. Negatif bir reaksiyonla, kültürün uygulama yerindeki renk değişmez. Olumlu bir sonuçla, bu koloni daha fazla araştırmadan çıkarılır.

Koyu kırmızı ile boyanmış kolonileri incelerken yeterince net olmayan bir sonuç elde edilirse, kültürü Endo besiyerinden nütrient agara aktarmak gerekir. İnkübasyondan sonra test tekrarlanır.

8.2.3.3. Gram'a Aitlik Tespiti

Oksidaz negatif koloniden bir yayma alınır, Gram boyanır ve mikroskobik olarak incelenir.

Alkolle yağı alınmış bir cam slayt üzerine, bir ilmek içinde 1 damla damıtılmış su uygulanır, analiz edilen koloniden az miktarda kültür eklenir ve camın yüzeyine yayılır. Smear oda sıcaklığında kurutulur ve brülörün alevi ile üç kez sabitlenir. Preparata bir şerit filtre kağıdı uygulanır ve üzerine (0.5-1) dakika boyunca karbolik bir mor centiyana çözeltisi dökülür, kağıt çıkarılır, Lugol çözeltisi (0.5-1) dakika boyunca dökülür, Lugol çözeltisi boşaltılır ve cam, boyanın çıkması durana kadar (0.5-1) dakika etil alkol içinde yıkanır. Daha sonra cam su ile iyice yıkanır ve (1-2) dakika boyunca distile su ile 1:10 oranında seyreltilmiş Ziel's fuchsin ile boyanır. Preparat yıkanıp kurutulduktan sonra yayma mikroskobik olarak incelenir.

Gram boyama için reaktiflerin hazırlanması Bölüm 5.9'da açıklanmıştır.

Gram negatif mikroorganizmalar pembe, Gram pozitif ise mavidir. Koliform bakteriler gram negatif çubuklardır.

Gram boyama, optik kullanımını gerektirmeyen Gregersen testi ile değiştirilebilir.

Gregersen testi: bir cam slayt üzerinde %3'lük bir sulu KOH çözeltisi damlasında, katı bir ortamdan alınan bakteri kütlesi emülsifiye edilir. Öze ile birkaç saniye karıştırdıktan sonra, süspansiyon müsilajlı hale gelir ve mukus iplikleri özenin arkasına uzanır, bu da test kültürünün veya koloninin gram negatif bir türe ait olduğunu gösterir. Gram pozitif bakterilerde mukoza iplikleri oluşmaz - reaksiyon negatiftir.

8.2.3.4. Laktoz fermantasyonunun belirlenmesi

Oksidaz-negatif gram-negatif izole koloninin geri kalanı, laktoz ortamı ile iki test tüpüne paralel olarak ekilir (p. 5.6):

OKB'nin varlığını doğrulamak için kültür (37 ± 1) °C sıcaklıkta 48 saat süreyle inkübe edilir;

TKB'nin varlığını doğrulamak için, aşılama (43-44) °C'lik bir sıcaklığa önceden ısıtılmış bir ortamda gerçekleştirilir ve 24 saat boyunca (44 ± 0,5) °C'lik bir sıcaklıkta inkübe edilir.

Asit ve gaz oluşumunun birincil muhasebesi, yarı sıvı ortam ve NIB'nin (bölüm 5.6) doğrulanmasıyla (4-6) saat sonra mümkündür.Asit ve gaz tespit edilirse, olumlu bir yanıt verilir. Asit ve gaz yokluğunda veya sadece asit varlığında, son TKB sayımı için kültürlü tüpler 24 saate kadar bırakılır.TTB'nin varlığını doğrulamak için kültürlü tüpler 24 saat sonra incelendikten ve negatif sonuç alındıktan sonra 48 saate kadar son sayıma bırakılır.

İncelenecek koloni küçükse, slant nütrient agar üzerinde alt kültür yapın ve (18-24) saat inkübasyondan sonra gerekli tüm doğrulama testlerini yapın.

8.2.3.5. Koloni yerleşiminde veya sürekli büyümede doğrulayıcı testler yapın

Filtre yüzeyinin bir kısmında veya tamamında koloniler veya sürekli büyüme gözlemlenirse, membran filtre, filtreden daha büyük çaplı, reaktifle zengin şekilde nemlendirilmiş bir filtre kağıdı çemberi üzerine veya bir NIB üzerine yerleştirerek bir oksidaz testi yapılır. distile su ile nemlendirilmiş oksidaz diski. Bir reaksiyonun ilk belirtileri ortaya çıktığında, ancak en fazla 5 dakika sonra, membran filtre Endo ortamına geri aktarılır. Reaksiyonun net bir tezahüründen sonra sonuç belirlenir. Mor-kahverengi veya mavi bir renk belirirse (kullanılan reaktife bağlı olarak), oksidaz testi pozitif olarak kabul edilir.

Filtrelerdeki tüm koloniler oksidaz pozitif ise dikkate alınmaz ve OKB ve TKB yokluğuna dair yanıt verir ve analizi tamamlar.

Negatif bir oksidaz reaksiyonu durumunda, izole koloniler elde edilene ve OKB ve TKB'ye ait oldukları 8.2.3.3-8.2.3.4 (kalitatif analiz) uyarınca teyit edilene kadar eleme yapılır.

8.2.4. Sonuçların muhasebeleştirilmesi

8.2.4.1. Gram negatif koloniler, asit ve gaz üretmek için 37°C'de negatif bir oksidaz testi ve laktoz fermentasyonu için TBC'ler olarak sayılır.

Gram negatif koloniler, negatif oksidaz testinde ve asit ve gaz üretimi ile 44°C'de laktoz fermentasyonunda TKB olarak sayılır.

8.2.4.2. Tüm filtrelerde yaygın ve ısıya dayanıklı koliform bakterilerin yokluğunda, sonuç "100 ml'de TCB'nin CFU'su yok" ve "100 ml'de TCB'nin CFU'su yok" olarak kaydedilir.

8.2.4.3. Büyümüş tüm şüpheli kolonilerin tanımlanması durumunda, TKB ve TKB'nin koloni oluşturan birimlerinin sayısı tüm filtrelerde sayılır ve CFU analizinin sonucu 100 ml su olarak ifade edilir.

Hesaplama aşağıdaki formüle göre yapılır:

X, 100 ml'deki koloni sayısıdır;

hesabın tutulduğu filtrelerden filtrelenen su hacmi;

a, bu filtrelerde sayılan toplam koloni sayısıdır.

1. 100 ml'lik 3 filtre ekildiğinde, 100 ml'de iki koloni büyümüştür, diğer iki filtrede üreme olmamıştır. Toplam veya ısıya dayanıklı koliformların sayısı şöyle olacaktır:

100 ml'de CFU OKB (TKB)

2. Filtrelenmiş hacmi 40 ml olan filtrelere 10, 40, 100 ve 150 ml ekerken, filtrelenmiş hacim 100-3 OKB olan 4 izole koloni büyüdü. 10 ml ve 150 ml hacimli filtreler büyümüştür ve muhasebeye tabi değildir. İzole kolonilerin elde edildiği bu filtrelerdeki toplam OKB (TKB) koloni sayısı toplanır ve 100 ml'lik bir hacim için yeniden hesaplanır.

100 ml'de CFU

8.2.4.4. Aynı türden kolonilerin seçici bir kontrolü sırasında eşit olmayan sonuçlar elde edilirse, bu tür koloniler arasındaki OKB veya TKB sayıları aşağıdaki formüle göre hesaplanır:

, nerede

X, aynı türden doğrulanmış bakteri sayısıdır;

a, bu türden toplam koloni sayısıdır;

- test edilenlerin sayısı;

c, pozitif sonuç veren kolonilerin sayısıdır.

Her koloni türü için muhasebe sonuçları toplanır ve daha sonra 8.2.4.3-8.2.4.4 maddelerine göre hesaplanır.

8.2.4.5. Nihai sonuç verilir: 100 ml'deki CFU TCB sayısı, 100 ml'deki CFU TCB sayısı.

Endo besiyerinde gram-negatif oksidaz-negatif bakteriler tarafından oluşturulan tipik koliform kolonileri tespit edilerek gösterge niteliğinde bir sonuç verilebilir. Nihai cevap, laktoz fermantasyonunun sonuçlarıyla doğrulanır.

8.2.4.6. Kolonileri veya sürekli büyümeyi tüm filtrelere bindirirken (madde 8.2.3.5), OKB ve TKB'ye ait olduğunun teyidi durumunda, “100 ml'de OKB tespit edildi” nitel bir sonuç verilir.

Filtredeki tüm koloniler oksidaz pozitif ise veya OKB ve TKB'ye ait oldukları doğrulanmıyorsa analiz tamamlanır, protokol "filtreler gömülür" der.

Her iki durumda da analiz tekrarlanır.

8.3. Titrasyon yöntemi ile yaygın ve termotoletal koliform bakterilerinin belirlenmesi

8.3.1. Gösterge kavramının tanımı

Madde 8.2.1'e göre OKB ve TKB göstergeleri kavramının tanımı.

8.3.2. Uygulama alanı

Titrasyon yöntemi kullanılabilir:

Membran filtrasyon ile analizi gerçekleştirmek için gerekli malzeme ve ekipmanın bulunmaması durumunda;

Askıda katı madde içeriği yüksek olan suyu analiz ederken;

Suda yabancı mikrofloranın baskın olması durumunda, filtrelerde ortak koliform bakteri izole kolonilerinin üretimini engeller.

8.3.3. Yöntem ilkesi

Yöntem, sabit bir hacimdeki suyun sıvı bir besin ortamına aşılanmasından sonra bakteri birikmesine, ardından laktozlu farklı yoğun bir besin ortamına yeniden kaplanmasına ve kolonilerin kültürel ve biyokimyasal testlerle tanımlanmasına dayanır.

8.3.4. Analiz yapmak

İçme suyu araştırmasında niteliksel yöntem(mevcut sıhhi ve epidemiyolojik denetim, üretim kontrolü) 3 hacim 100 ml inoküle edin.

Amaç için su çalışırken niceleme OKB ve TKB, yeniden analiz edildiğinde inoküle: 3 hacim 100 ml, 3 hacim 10 ml, 3 hacim 1 ml.

Test suyunun her bir hacmi, madde 5.5'e göre hazırlanan bir laktoz-pepton ortamına aşılanır. 100 ml ve 10 ml su 10 ve 1 ml konsantre laktoz-pepton ortamında aşılanır, 1 ml numunenin aşılaması 10 ml normal konsantrasyon ortamında yapılır.

Mahsuller (37 ± 1) °C'de 48 saat kuluçkaya yatırılır, 24 saatten önce olmaz. kuluçka yapılır ön değerlendirme ekinler. Büyüme (bulanıklık) ve gaz oluşumunun görüldüğü kaplardan, izole koloniler elde etmek için Endo besiyerinin (bölüm 5.4.1) sektörlerine bakteriyolojik bir halka aşılanır.

Büyüme ve gaz oluşumu olmayan kaplar bir termostatta bırakılır ve son olarak 48 saat sonra incelenir.Büyüme belirtisi olmayan ürünler negatif olarak kabul edilir ve daha fazla araştırmaya tabi tutulmazlar. Bulanıklık ve gaz oluşumu veya sadece bulanıklık görülen kaplardan Endo besiyerinin sektörlerine ekim yapılır.

Endo besiyerindeki inokülasyonlar (37 ± 1) °C sıcaklıkta (18-20) saat inkübe edilir.

Biriktirme ortamında bulanıklık ve gaz oluşumu ve laktoz pozitif bakterilere özgü kolonilerin Endo besiyerinde büyüme ile: metalik bir parlaklığa sahip olan veya olmayan koyu kırmızı veya kırmızı, kırmızı merkezli dışbükey ve besin üzerinde bir baskı ortam, belirli bir numune hacminde yaygın koliform bakterilerin varlığına olumlu bir yanıt verirler.

OKB'nin varlığının teyit edilmesi gerekmektedir:

Birikim ortamında sadece bulanıklık not edilirse;

Laktoz pozitif kolonilere ait olup olmadığı araştırmacı tarafından sorgulanabilir. Bu durumlarda:

Şüpheli bir koloniyi döngüye soktuktan sonra Endo'nun besiyerinde bir iz olup olmadığını kontrol edin;

Oksidaz testini madde 8.2.3.2'ye göre gerçekleştirin;

Madde 8.2.3.3'e göre Gram'a ait olduğunu onaylayın;

Gaz oluşumu yeteneği, madde 5.6'ya göre laktozlu ortam üzerinde her sektörden her türden izole edilmiş 1-2 koloninin aşılanması ve ardından aşıların (37 ± 1) °C sıcaklıkta (37 ± 1) °C sıcaklıkta inkübasyonu ile doğrulanır ( 24-48) saat.

İzole kolonilerin yokluğunda, eleme Endo besiyerinde geleneksel bakteriyolojik yöntemlerle gerçekleştirilir.

Aşağıdaki durumlarda olumsuz bir yanıt verilir:

Biriktirme ortamında herhangi bir büyüme belirtisi yok;

Endo ortamının sektörlerinde büyüme yoktur;

Koliform bakterilerin özelliği olmayan koloniler (pürüzlü kenarlarla şeffaf, bulanık, vb.) Endo besiyerinin sektörlerinde büyüdü;

Tüm koloniler oksidaz pozitifti;

Tüm koloniler Gram pozitifti;

Karbonhidratlı ortamda yapılan doğrulama testinde gaz oluşumu not edilmezse.

belirlemek için termotolerant koliform bakteri Tipik laktoz pozitif kolonilerin büyüdüğü Endo ortamının sektörleriyle çalışın. Paragraf 5.6'ya göre hazırlanan laktoz ortamlarından herhangi biri ile test tüplerinde her sektörden her türden 2-3 izole koloni ekilir.

Ekimden önce, ortam bir su banyosunda veya bir termostatta 44 °C'ye ısıtılır. İnokulasyondan hemen sonra tüpler bir termostata yerleştirilerek (44 ± 0,5) °C sıcaklıkta 24 saat inkübe edilir.(4-6) saat sonra inokülasyonların görülmesine izin verilir.

Biriktirme ortamında gaz oluşumu, Endo besiyeri üzerinde laktoz pozitif bakterilerin üremesi ve bu bakterilerin 44 °C sıcaklıkta 24 saat laktozu asit ve gaza fermente etme yeteneğinin saptanması ile bu ciltte bir örneğin varlığına olumlu bir cevap TKB su. Diğer tüm durumlarda, olumsuz bir cevap verirler.

TKB'nin varlığına bir yanıtın verilmesini hızlandırmak için, biriktirme ortamının hacimlerinden 1 ml aşılamak için, bir şamandıralı bir laktoz-pepton ortamı olan bir test tüpünde bulanıklık ve gaz oluşumunun görüldüğü durumlarda izin verilir. madde 5.6 ve önceden 44 ° C'ye ısıtıldı. Mahsuller bir termostatta (44 ± 0,5) °C sıcaklıkta 24 saat bekletilir, asit ve gaz tespit edilirse olumlu yanıt verirler.

8.3.5. Sonuçların muhasebeleştirilmesi

100 ml'lik 3 ciltlik çalışmada, sonuçlar kalitatif olarak değerlendirilir ve 3 ciltten en az birinde OKB ve TKB saptanırsa “100 ml'de bulunan” protokole giriş yapılır.

Kantitatif yöntem çalışmasında OKB ve TKB'nin en olası sayısı (MPN) Tabloya göre belirlenir. 1.1 uygulamalar 1.

Sonuç, bir güven aralığı olmadan rapor edilir.

Araştırılan tüm hacimlerde TKB ve TKB'nin varlığına olumsuz yanıt verilmesi durumunda, “100 ml'de bulunamadı” protokolünde bir sonuç çıkarılır.

8.4. Sülfit indirgeyen clostridia sporlarının belirlenmesi

8.4.1. Gösterge kavramının tanımı

Sülfit indirgeyici clostridia, (16-18) saat boyunca (44 ± 1) °C sıcaklıkta demir-sülfit agar üzerinde sodyum sülfiti indirgeyen spor oluşturan anaerobik çubuk şeklindeki mikroorganizmalardır.

8.4.2. Yöntem ilkesi

Yöntem, anaerobik koşullara yakın koşullar altında demir sülfit agarda mahsul yetiştirmeye ve siyah kolonilerin sayısını saymaya dayanmaktadır.

8.4.3. Analiz yapmak

8.4.3.1. 20 ml'lik bir su numunesi, bitkisel formları hariç tutmak için test tüplerindeki bir su banyosunda (75 ± 5)°C'lik bir sıcaklıkta 15 dakika ısıtılır.

Klorlu su çalışmasında numunenin ısıtılması ihmal edilebilir.

Her içme suyu örneğinden 20 ml kültürlenir veya süzülür. Gerekirse, mahsullerde (filtrelerde) 10-15'ten fazla koloni büyümeyecek şekilde hacimleri seçin. Bu durumda, önceki çalışmaların sonuçları tarafından yönlendirilirler.

Su filtrasyonu, paragraf 7'de belirtilen gerekliliklere uygun olarak gerçekleştirilir.

8.4.3.2. Test tüplerinde filtrasyon ile tayin

İnokülasyondan önce, 5.8'e göre hazırlanmış demir sülfit agarlı tüpler bir su banyosunda eritilir (kaynatmayın!). Ekim sırasında besiyeri bir su banyosunda (70-80) °C'ye kadar ısıtılır.

Belirlenen hacimdeki su süzüldükten sonra membran filtre iki zıt kenarından alevli cımbızla alınır ve tüp şeklinde bükülerek sıcak agarlı test tüpüne yerleştirilir. Filtrenin yerleşmiş bakterili tarafı içe dönüktür. Bu durumda, filtre düzleştirilir ve test tüpünün duvarı boyunca bulunur.

İnokülasyondan hemen sonra, agarlı tüp ve anaerobik koşullar oluşturmak için bir filtre içeren bir kaba yerleştirilerek hızla soğutulur. soğuk su. Mahsulleri (44 ± I) °C'de (16-18) saat boyunca yetiştirin.

8.4.3.3. Petri kaplarında filtrasyon ile tayin

(55-60) mm çapındaki petri kapları, ince bir demir-sülfit agar tabakası ile doldurulur. Filtrelemeden sonra, filtrenin altında hava kabarcığı kalmaması için filtreyi, filtre yüzeyi aşağıda olacak şekilde katılaşmış besin ortamının üzerine yerleştirin. Ardından, anaerobik koşullar yaratmak için kapağın ortama tam oturması için erimiş demir sülfit agarı tabağın üstüne dökün. Mahsulleri (44 ± 1) °C'de (16 - 1 8) saat boyunca yetiştirin.

8.4.3.4. Doğrudan tohumlama ile belirleme

Demir sülfit agar şişeleri ve su numunesi 8.4.3.1'de açıklandığı gibi hazırlanır.

Steril test tüplerine ekleyin:

2 test tüpünde 10 ml (hacimce en az 30 ml) veya

4 test tüpünde 5 ml (her biri 15 ml).

Mahsuller, su hacmini 2 kat aşan bir miktarda sıcak demir-sülfit agar ile dökülür. Ortamı, hava kabarcıklarının oluşmasını önleyerek test tüpünün duvarı boyunca dökün. Bundan sonra tüp, anaerobik koşullar oluşturmak için bir soğuk su kabına yerleştirilerek hızla soğutulur. İnokülasyonlar (44 ± 1) °C'de (16-18) saat süreyle inkübe edilir.

8.4.4. Sonuçların muhasebeleştirilmesi

Yalnızca izole kolonilerin elde edildiği ürünler nicel muhasebeye tabidir. Hem filtrelerde hem de besin ortamının kalınlığında büyütülen siyah koloniler sayılır.

Analizin sonucu, 20 ml su içinde sülfit indirgeyen clostridia sporlarının koloni oluşturan birimlerinin (CFU) sayısı olarak ifade edilir.

Tüm filtrelerde siyah koloni üremesi yoksa cevap “20 ml suda bulunmaz” olacaktır.

Birleşen büyüme nedeniyle kolonileri saymak mümkün değilse, sonuç kalitatif olarak değerlendirilir, protokol "20 ml'de bulunur" notunu verir. Gerekirse, nicel bir sonuç elde etmek için analiz tekrarlanır.

8.5. kolifajların tanımı

8.5.1. Gösterge kavramının tanımı

Kolifajlar, E. coli'yi parçalayabilen ve nütrient agar üzerinde (18 ± 2) saat bakteriyel çim liziz bölgelerinden (plaklar) sonra (37 ± 1)°C sıcaklıkta oluşturabilen bakteriyel virüslerdir.

8.5.2. Kolifajların belirlenmesi için titrasyon yöntemi

8.5.2.1. Yöntem ilkesi

İçme suyunda kolifajların belirlenmesi, E. coli kültürü üzerinde zenginleştirme ortamında kolifajların ön birikiminden ve ardından besleyici agar üzerinde E. coli çiminin lizis (aydınlanma) bölgelerinin tanımlanmasından oluşur.

8.5.2.2. Uygulama alanı

Yöntem, içme suyu kalitesinin mevcut izlenmesi için tasarlanmıştır.

8.5.2.3. Test kültürünün hazırlanması E. coli K12 StrR.

Çalışmanın tüm aşamalarında hazırlanan bakteri süspansiyonu Aşağıdaki şekilde: E. coli kültürü, streptomisinli eğimli besleyici agar içeren bir test tüpüne aşılanır (bölüm 5.3.5). (37 ± 1) °C sıcaklıkta (18 ± 2) saat inkübasyondan sonra, eklemdeki bakterileri 5 ml steril salin (%0,85 NaCl solüsyonu) ile yıkayın ve bulanıklık standardına göre bir süspansiyon hazırlayın. 1 ml'de 109 bakteri hücresi konsantrasyonunda E. coli.

37°C sıcaklıkta bir termostatta büyütülerek elde edilen 4 saatlik bir E. coli et suyu kültürünün kullanılmasına izin verilir. 109 E. coli bakteri hücresi konsantrasyonu 2 ml'de bulunur.

8.5.2.4. Niteliksel bir analiz yapmak

10 ml 10 misli besin suyu (madde 5.2.2'ye göre hazırlanmıştır) ve 1 ml test kültürünün hazırlanmış yıkaması veya 2 ml 4 saatlik et suyu kültürü (madde 8.5.2.3) 100'e eklenir. ml su numunesi inceleniyor.

Kültür kontrolü için 0.1 ml E. coli yıkaması (veya 0.2 ml 4 saatlik et suyu kültürü) bir Petri kabına yerleştirilir ve besleyici agar ile kaplanır.

Test suyu numunesi (100 mi) ve E. coli kontrollü Petri kabı bir termostata yerleştirilir ve (37 ± 1) °C sıcaklıkta (18 ± 2) saat inkübe edilir.

İnkübasyondan sonra 10 ml test suyu numunesi bir test tüpüne dökülür ve 1 ml kloroform ilave edilir.

Test tüpü steril bir kauçuk veya silikon tıpa ile kapatılır, kloroformun numune hacmine eşit olarak dağılması için kuvvetlice çalkalanır ve kloroform tamamen çökene kadar en az 15 dakika oda sıcaklığında bırakılır.

Önceden eritilmiş ve (45-49) °C'ye soğutulmuş Nutrient agarda, hazırlanan E. coli bakteri yıkamasını (madde 8.5.2.3) 1.0 ml yıkama (veya 2 ml 4 saatlik et suyu) oranında ekleyin. kültür) 100 ml agar başına.

Kloroform ile muamele edilmiş (kloroforma dokunmadan) numunenin 1 ml'sini bir test tüpünden bir pipet ile steril bir Petri kabına aktarın ve eritilmiş ve (45-49) ° C'ye soğutulmuş bir nütrient agar karışımı ile doldurun. (12-15) ml, ayrıca kontrol E. coli kültürleri için bir ek Petrid kabı ve su ve agar numunelerini eşit şekilde karıştırmak için hafifçe sallayın. Tam katılaşma için bardaklar 10 dakika oda sıcaklığında masanın üzerinde bırakılır. Katılaşmadan sonra kaplar ters çevrilir ve 37 °C'de (18 ± 2) saat boyunca bir termostata yerleştirilir.

Bir dizi numune gerçekleştirirken, tüm seri için genel bir kontrol yapılır.

Sonuçların muhasebeleştirilmesi

İletilen ışıkta gerçekleştirilen ekinleri görüntüleyin.

Numune, tam lizis varlığında, birkaç plaktan temizlendiğinde, kontrol plaketi üzerinde liziz bölgelerinin yokluğunda bir su numunesi ile plakta bir plakta pozitif olarak kabul edilir.

Analiz protokolü notları: 100 ml suda kolifajlar bulundu veya bulunamadı (niteliksel sonuç).

Kültür kontrolünde lizis bölgeleri varsa, sonuç geçersiz kabul edilir.

8.5.2.5. Kantitatif Analiz Yapmak

100 ml'lik incelenen su örneğini 6 hacme dökün: 1 şişe 50 ml ve 5 test tüpü 10 ml. 50 ml numuneye, 5 ml 10-kat besin suyu (paragraf 5.2.2'ye göre) ve 0.5 ml yıkama (veya 1 ml 4 saatlik et suyu kültürü) E. coli bakterisi (paragraf 8.5) ekleyin. .2.3). Numunenin her 10 ml'sine 1 ml on misli besin suyu ve 0,1 ml yıkama (veya 0,2 ml 4 saatlik et suyu kültürü) E. coli bakterisi ekleyin.

Kültür kontrolü için, E. coli'nin OD ml bakteri yıkaması (veya 0,2 ml 4 saatlik et suyu kültürü) bir Petri kabına yerleştirilir ve besleyici agar ile doldurulur.

Mahsuller (37 ± 1) °C sıcaklıkta 18 ± 2 saat süreyle inkübe edilir.

İnkübasyondan sonra, 50 ml'lik bir hacimden 10 ml'yi bir test tüpüne dökün. 6 test hacminin tümüne 1 ml kloroform ekleyin. Test tüplerini steril kauçuk veya silikon tıpalarla kapatın, kloroformu numune hacmine eşit olarak dağıtmak için kuvvetlice sallayın ve kloroformun çökelmesi için en az 15 dakika oda sıcaklığında bırakın.

Önceden eritilmiş ve (45-49) °C'ye soğutulmuş besleyici agarda, hazırlanan E. coli bakteri yıkamasını (bölüm 8.5.2.3) 1.0 ml yıkama (veya 2 ml 4 saatlik et suyu) oranında ekleyin. kültür) 100 ml agar başına . Hazırlanan karışımı Petri kaplarına dökün: E. coli kültürünü lizojenite açısından kontrol etmek için 1 fincan ve incelenen her su numunesi için bir fincan. Birkaç su örneğinin eş zamanlı analizi ile E. coli kültürünün bir kontrolü yerleştirilir.

Agar katılaştıktan sonra, numunelerin aşılanması amaçlanan kaplar, çalışılan hacimlere göre etiketlenen 6 sektöre ayrılır. Pasteur pipetiyle (mikropipet veya uzunlamasına vuruşlu bakteriyolojik halka), ilgili test tüpünden her sektöre 1 damla süpernatan sıvı (kloroformsuz) uygulayın.

Damlalar kuruduktan sonra, test numunelerinin olduğu kapları ve kontrol kabını (18 ± 2) saat boyunca (37 ± 1) °C'de bir termostata yerleştirin.

Sonuçların muhasebeleştirilmesi

Sonuçlar iletilen ışıkta görüntülenir.

Muhasebe, E. coli çiminin sektörlerinde aydınlanma bölgelerinin (lizis) varlığı ile gerçekleştirilir.

Damla tohumlama yöntemini bir pipetle kullanırken, yuvarlak bir nokta veya ayrı plaklar şeklinde bir lizis bölgesi oluşur. Bakteriyolojik bir döngü ile uzunlamasına bir vuruş ekerken, vuruş boyunca lizis not edilir.

Kontrol plakasında lizis bölgelerinin yokluğunda en az bir sektörde bir liziz bölgesi varsa numune pozitif olarak kabul edilir.

Değerlendirme, plak oluşturan birimlerin (PFU) en olası sayısı (MPN) tablosuna göre yapılır (Tablo 1.2). Analiz protokolü, 100 ml sudaki en olası kolifaj sayısını ve olası dalgalanma aralığını gösterir: 100 ml'de kolifajların LF PFU (alt limit - üst limit). Sonuç yarı niceldir.

Kontrol kabında parçalanma bölgeleri varsa, sonuç geçersiz sayılır.

8.5.3. Kolifajları belirlemek için doğrudan yöntem

.1. Yöntem ilkesi

İçme suyunda kolifajların belirlenmesi, doğrudan aşılama yoluyla normalize edilmiş bir su hacminin (100 mi) çalışılmasından ve daha sonra besin agarlı Petri kaplarında E. coli çimi üzerindeki liziz bölgelerinin (plaklar) kaydedilmesinden oluşur.

8.5.3.2. Alan adı

Salgın endikasyonlarına göre yapılan çalışmalarda kolifajların sudan direkt izolasyon yöntemi titrasyon yöntemine paralel olarak yürütülmektedir.

8.5.3.3. Analiz yapmak

Çift konsantrasyonlu (s. 5.3.2), eritilmiş ve (45-49) ° C'ye soğutulmuş besleyici agarda, 2.0 ml yıkama (veya 4 ml) oranında E. coli yıkama (p. 8.5.2.3) ekleyin. 4 saatlik et suyu kültürü) her 100 ml agar için karıştırın. Araştırılan 100 ml suyu 20 ml'lik büyük test tüplerine dökün, (35-44) °C'ye ısıtın ve hemen (gerekli sıcaklığa ulaştıktan en fazla 5 dakika sonra) 5 Petri kabına dökün ve hemen her kaba 20 ml ekleyin. E. coli kültürü ile agar karışımları.

E. coli kültürünü kontrol etmek için, (35-44) ° C'ye önceden ısıtılmış 20 ml steril musluk suyunu bir Petri kabına ekleyin, E. coli ile hazırlanmış 20 ml agarı dökün ve hafifçe karıştırın.

Bardakların içeriğini yavaşça karıştırın ve katılaşana kadar oda sıcaklığında bırakın. Donmuş agarlı plakaları baş aşağı bir termostata yerleştirin ve (37 ± 1) °C sıcaklıkta (18 ± 2) saat inkübe edin.

Sonuçların muhasebeleştirilmesi

Ekinlerin görüntülenmesi iletilen ışıkta gerçekleştirilir.

Sonuçların muhasebeleştirilmesi, 5 Petri kabında yetiştirilen plakların sayılması ve toplanmasıyla gerçekleştirilir. Sonuçlar, 100 ml su numunesi başına plak oluşturan birimler (PFU) olarak ifade edilir. Kontrol tabağında plak bulunmamalıdır.

Çoğu zaman, lizis bölgeleri, açıkça tanımlanmış veya silinmiş sınırları olan, yuvarlak izole edilmiş plaklar (1 ila 5-7 mm) şeklinde, besleyici agar test kültürü çiminin arka planına karşı şeffaf noktalar gibi görünür.

Yüksek faj konsantrasyonlarında, farklı bir lizis paterni gözlemlenir.

Negatif kolonilerin füzyonu, E. coli'nin "açık" bir çimini, sürekli liziz arka planına karşı tek E. coli kolonilerinin büyümesini veya tabakta tam bir büyüme eksikliği verir.

Doğrudan aşılama ile, homojen olmayan bir şekilde katılaşmış agar tarafından maskelenen ve beraberindeki mikroflora ile kapatılan lizis mümkündür. Doğrudan aşılamadan gelen kondensat ve homojen olmayan şekilde ayarlanmış agar damlacıkları, E. coli çiminde görsel olarak lizizi andıran artefaktların oluşmasına yol açabilir.

Sonuçların ön muhasebesi (5-6) saatlik inkübasyondan sonra yapılabilir. Bu aşamada, berrak lizis bölgelerinin varlığında, suda kolifajların varlığı hakkında bir ön cevap verilebilir.

Doğrudan aşılamanın nihai nicel kaydı (18 ± 2) saat sonra gerçekleştirilir Sonuçlar, 100 ml su numunesi başına plak oluşturan birimlerin (PFU) sayısı olarak ifade edilir.

Birleşik plak büyümesi not edilirse ve sayım zorsa, doğrudan tohumlamaya göre kalitatif bir sonuç verilebilir: “100 ml suda bulunur”.

Direkt yöntemle çalışıldığında olumsuz bir sonuç alınırsa, titrayon yönteminin sonuçlarına göre nihai cevap verilir.

Kontrol kabında parçalanma bölgeleri varsa, çalışmanın sonucu geçersiz sayılır.

8.5.4. Kontrolleri ayarlama

8.5.4.1. Negatif kontrol

Negatif kontrol, hazırlama ve analiz aşamalarında besleyici ortam, laboratuvar cam eşyaları, ekipmanda faj kontaminasyonu olmadığını doğrular ve ayrıca test kültürünün E yeteneğini değerlendirmenize olanak tanır. coli tek tip bir çim vermek için.

Negatif kontrol, analiz edilen su örneğine benzer şekilde gerçekleştirilen steril musluk suyu çalışmasıdır. Bu nedenle, su titrasyon yöntemiyle analiz edilirken, ek bir test tüpüne 10 ml steril musluk suyu eklenir. Suyu doğrudan aşılama ile analiz ederken, ilave bir altıncı Petri kabına 20 ml steril musluk suyu eklenir.

Ek ürünler, ana örneklerle aynı şekilde kolifajlar için incelenir.

Bir dizi numuneyi analiz ederken, her bir analiz türü için bir negatif kontrol olabilir: titrasyon ve doğrudan. Bu durumda, bu serinin tüm numuneleri işlendikten sonra negatif kontrol aşamalandırılır.

Negatif kontrol plakalarında kolifaj plakları bulunursa, tüm su örnekleri serisinin çalışmasının sonuçları geçersizdir.

E. coli K12 F + StrR test suşunun saflığı için laboratuvar ekipmanı, mutfak eşyaları, besin ortamının sterilliğini kontrol etmek ve kontrol inokülasyonunu tekrarlamak gerekir.

Negatif kontrol sıklığı - günde 1 kez.

8.5.4.2. Parçalanmanın faj yapısını doğrulama yöntemi

Şüpheli durumlarda, hem titrasyon hem de doğrudan yöntemlerle çalışırken, lizizin faj yapısını doğrulamak için bir kontrol aşılaması yapmak gerekir.

Bu amaçla, kolifajlardan şüphelenilen agarın bir bölümünü çıkarmak için bakteriyolojik bir öze kullanılır, 5 ml'lik besin suyuna koyun, burada bir damla E. coli test kültürü eklenir ve 37 ° C'de (16) için inkübe edilir. -18) saat Nihai kültür, kloroform ile işleme tabi tutulur ve faj varlığı açısından incelenir. Tohumlama, nütrient agar sektörlerinde bir öze veya pipetle, paragraf 8.5.2.5'te açıklananla aynı şekilde gerçekleştirilir. Herhangi bir sektördeki lizis, fajın varlığının teyidi olarak kabul edilir.

Bu su analizi yöntemi ile gözenek boyutu yaklaşık 0.45 mikron olan özel bir zardan belirli bir miktar su geçirilir. Sonuç olarak, suda bulunan tüm bakteriler membran yüzeyinde kalır. Daha sonra bakteri içeren zar, 30-37 °C sıcaklıkta özel bir besin ortamına belirli bir süre yerleştirilir. Kuluçka dönemi olarak adlandırılan bu dönemde, bakteriler çoğalma ve zaten sayılması kolay, iyi tanımlanmış koloniler oluşturma fırsatına sahiptir. Sonuç olarak şunu gözlemleyebilirsiniz: Hatta bu resim:

Bu su analizi yöntemi, yalnızca toplam koloni oluşturan bakteri sayısını belirlemeyi içerdiğinden farklı şekiller, o zaman sonuçlarına göre sudaki patojenik mikropların varlığını kesin olarak yargılamak imkansızdır. Bununla birlikte, yüksek bir mikrobiyal sayı, suyun genel bir bakteriyolojik kontaminasyonunu ve patojenik organizmaların mevcudiyetinin yüksek olasılığını gösterir.

Suyu analiz ederken, sadece toksik içeriği kontrol etmek için gerekli değildir. kimyasal maddeler, aynı zamanda içme suyunun bakteriyolojik kirlenmesini karakterize eden mikroorganizmaların sayısı, TMF toplam mikrobiyal sayıdır.Merkezi su kaynağının suyunda bu sayı 50 CFU / ml'yi geçmemeli ve kuyularda, kuyularda - 100'den fazla olmamalıdır. CFU / ml

Suyun sıhhi ve mikrobiyolojik araştırmaları planlı bir şekilde gerçekleştirilir.
mevcut sürveyans amacıyla ve ayrıca özel epidemiyolojik
kim tanıklık. Bu tür araştırmaların ana nesneleri şunlardır:

- merkezi su kaynağının içme suyu (musluk suyu);

- merkezi olmayan su kaynağının içme suyu;

- yüzey ve yeraltı su kaynaklarından gelen su;

— atık su;

- denizlerin kıyı bölgelerinin suyu;

- Yüzme havuzu suyu.

Mevcut düzenleyici belgelere göre içme suyunun mikrobiyolojik durumunu değerlendirmek için ana göstergeler şunlardır:

1. Toplam mikrobiyal sayı (TMC) - 1 ml sudaki mezofilik bakteri sayısı.

eğer titre- en az birinin yaşadığı en küçük su hacmi (ml olarak)
BGKP ile ilgili mikrobiyal hücre.
BGKP endeksi- 1 litre sudaki BGKP miktarı.

3. 20 ml sudaki sülfit indirgeyen clostridia sporlarının sayısı.

4. 100 ml sudaki kolifaj sayısı.

TMC'nin belirlenmesi, içme suyunun mikrobiyolojik kontaminasyon seviyesinin değerlendirilmesini mümkün kılar. Bu gösterge, yoğun mikrobiyal kontaminasyonun acil tespiti için vazgeçilmezdir.

Toplam mikrobiyal sayı- bu, iki kat artışla görülebilen, 37 ° C sıcaklıkta ve 24 saat içinde besleyici agar üzerinde koloniler oluşturabilen mezofilik aerobik ve fakültatif anaerobik mikroorganizmaların sayısıdır.

Toplam mikrobiyal sayı belirlenirken steril bir Petri kabına 1 ml test suyundan ilave edilir ve 10-12 ml ılık (44°C) erimiş nütrient agar dökülür. Besiyeri su ile nazikçe karıştırılır, homojen ve
bardağın dibine dağılan hava kabarcıkları olmadan, ardından bir kapakla kapatın ve katılaşmaya bırakın. Mahsuller bir termostatta 37 °C'de 24 saat kuluçkaya yatırılır. yukarı saymak Toplam Her iki tabakta da yetiştirilen koloniler ve ortalama değeri belirler. Nihai sonuç, 1 ml test suyundaki koloni oluşturan birimlerin (CFU) sayısı olarak ifade edilir. 1 ml içme suyu 50 CFU'dan fazla içermemelidir.

BGKP'un tanımı
Aynı zamanda yaygın koliform bakterileri - OKB ve termotolerant koliform bakterileri - TKB belirlenir.

GKB, laktozu asit ve gaza 37°C'de 24-48 saat fermente eden, gram-negatif, spor oluşturmayan çubuklardır. TKB, OKB arasındadır, işaretleri vardır, ancak 44 ° C'de fermente ederim. Enterobakterilerin belirlenmesi için - membran filtreleri veya titrasyon yöntemi.

Mikrobiyal sayı - içme suyunun mikrobiyolojik durumunu değerlendirmek için ana kriterler, Mevcut düzenleyici belgelere dayanarak, bir besin ortamında günde 37 derece sıcaklıkta oluşturulan bir mililitre sudaki aerobik ve anaerobik bakteri sayısını karakterize eden TMC'dir (toplam mikrobiyal sayı).

Su temin sistemlerinin içme suyunun kalite göstergeleri.

Bu gösterge, yoğun mikrobiyal kontaminasyonun hızlı tespiti için neredeyse vazgeçilmezdir.

İçin toplam mikrobiyal sayının belirlenmesi Bir mililitre test suyundan steril bir Petri kabına ilave edilir, ardından 10-15 ml ılık (yaklaşık 44°C) besin agarı erimiş halde dökülür. Besiyeri suyla dikkatlice karıştırılır, kabın dibine eşit ve hava kabarcığı olmadan dağıtılır, daha sonra bir kapakla kapatılır ve katılaşana kadar Petri kabında bırakılır. Aynısı diğer fincan içinde yapılır. Bir termostatta ekim, gün boyunca 37 ° C sıcaklıkta inkübe edilir. Daha sonra mikroskop altında çift büyütmede iki kapta gelişen toplam koloni sayısı sayılır ve ortalama değer belirlenir. 1 ml içme suyunda 50 CFU'dan fazla olmamalıdır.

(ana yöntem)

Yöntem, belirli bir hacimdeki suyun (300 ml) membran filtrelerden süzülmesine, ekinlerin laktozlu (Endo) ayırıcı tanı ortamında yetiştirilmesine ve ardından kültürel ve biyokimyasal özelliklerle kolonilerin tanımlanmasına dayanır.

Analiz için hazırlanan (kaynatılmış veya başka bir şekilde sterilize edilmiş) membran filtreler steril cımbızla filtre aparatının hunisine yerleştirilir. Cihazın hunisine ölçülü bir hacimde su dökülür ve vakum oluşturulur. Filtrasyondan sonra filtre çıkarılır ve ters çevrilmeden Endo besin ortamının yüzeyine yerleştirilir.

Bir fincana 3 filtre sığabilir. İçme suyu çalışmasında 3 hacim 100 ml süzülür. kalitesi bilinmeyen suyu analiz ederken, filtrede (10.40, 100 ve 150 ml) izole koloniler elde etmek için diğer hacimlerdeki suyun filtrelenmesi tavsiye edilir.

Filtre kapları, 24 saat süreyle 37°C'de bir inkübatörde baş aşağı inkübe edilir.

Filtrelerde üreme yoksa veya atipik membranöz, küflü, bulanık koloniler oluşmuşsa negatif sonuç verirler. OKB ve TKB, çalışılan suyun 100 ml'sinde yoktur.

Filtreler üzerinde tipik izole laktoz pozitif (filtrenin arka yüzünde baskılar olan koyu kırmızı) kolonilerin büyümesi ile sayıları sayılır ve OKB ve TKB'ye ait oldukları doğrulanmaya başlar.

3-4 Gram boyalı kolonilerden smearlerin mikroskobik incelemesi yapılır (gram-negatif olanlar dikkate alınır);

Oksidazın varlığı belirlenir (oksidaz-negatif olanlar dikkate alınır, çünkü oksidaz-pozitif gram-negatif çubuklar enterobakterilere ait değildir, ancak örneğin psödomonadlar olabilir);

Laktozun asit ve gaza fermantasyonu, hafif renkli koloniler ve bunların TKB ile ilişkisi için önemli olan 37 °C sıcaklıkta ve bunların ait olup olmadığına karar vermek için 44 ± 0,5 °C sıcaklıkta belirlenir. TKB.

Oksidaz testinin ayarlanması

%1 alkol solüsyonu α-naftol ve %1 ile nemlendirilmiş kağıt üzerinde sulu çözelti dimetilfenilendiamin, renkli koloninin bir kısmını platin halka veya cam çubukla uygulayın. 1 dakika, maksimum 4 dakika içinde mavi veya mor bir renk belirirse reaksiyon pozitif olarak kabul edilir. Oksidaz pozitif koloniler dikkate alınmaz ve daha fazla araştırmaya tabi tutulmaz.

Reaktifle nemlendirilmiş kağıda koloniler içeren filtreyi aktarmak mümkündür. Damıtılmış suyla nemlendirilmiş hazır kağıt sistemlerini (NIB'ler) kullanabilirsiniz.

Gram-negatif oksidaz-negatif bakteri kolonilerinin bir kısmı, laktozu fermente etme kabiliyeti açısından test edilir. Bu, laktozlu yarı sıvı bir ortam ve bir pH göstergesi kullanır. 2 test tüpünde tabana enjeksiyon ile ekim yapılır. Biri TKB ile ilişkiyi doğrulamak için 24-48 saat 37 ± 1 °C sıcaklıkta, diğeri 44 ± 0,5 °C sıcaklıkta 24 saat süreyle inkübe edilir, 4-6 saat sonra kayıt yapılabilir. TKB'nin varlığı.

Koloniler filtre üzerine bindirilirken elekten geçirilir, ardından ortaya çıkan izole koloniler tanımlanır. Koloniler OKB olarak sayılır - Endo'da kırmızı iseler, 37 °C sıcaklıkta laktozu asit ve gaza ayrıştıran gram-negatif oksidaz-negatif çubuklar içerirler. Koloniler, laktozu 44 °C sıcaklıkta asit ve gaza fermente eden gram-negatif oksidaz-negatif çubuklar içeriyorsa TKB olarak sayılır (Şema No. 2).

ŞEMA № 2

Yayın tarihi: 2014-11-02; Okuyun: 1811 | Sayfa telif hakkı ihlali

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018.(0,001 s) ...

Toplam mikrobiyal sayı

Bu su analizi yöntemi, yalnızca farklı türlerdeki koloni oluşturan bakterilerin toplam sayısını belirlemeyi içerdiğinden, sonuçları sudaki patojenik mikropların varlığını kesin olarak yargılayamaz. Bununla birlikte, yüksek bir mikrobiyal sayı, suyun genel bir bakteriyolojik kontaminasyonunu ve patojenik organizmaların mevcudiyetinin yüksek olasılığını gösterir.

Suyu analiz ederken, sadece toksik kimyasalların içeriğini değil, aynı zamanda içme suyunun bakteriyolojik kontaminasyonunu karakterize eden mikroorganizmaların sayısını da kontrol etmek gerekir.TMF toplam mikrobiyal sayıdır.Merkezi su kaynağının suyunda bu sayı olmalıdır. 50 CFU / ml'yi geçmez ve kuyularda, kuyularda - 100 cfu/ml'den fazla değil

- merkezi su kaynağının içme suyu (musluk suyu);

- merkezi olmayan su kaynağının içme suyu;

- yüzey ve yeraltı su kaynaklarından gelen su;

- atık su;

- denizlerin kıyı bölgelerinin suyu;

- Yüzme havuzu suyu.

Mevcut düzenleyici belgelere göre içme suyunun mikrobiyolojik durumunu değerlendirmek için ana göstergeler şunlardır:

1. Toplam mikrobiyal sayı (TMC) - 1 ml sudaki mezofilik bakteri sayısı.

eğer titre- en az birinin yaşadığı en küçük su hacmi (ml olarak)
BGKP ile ilgili mikrobiyal hücre.
BGKP endeksi- 1 litre sudaki BGKP miktarı.

3. 20 ml sudaki sülfit indirgeyen clostridia sporlarının sayısı.

4. 100 ml sudaki kolifaj sayısı.

TMC'nin belirlenmesi, içme suyunun mikrobiyolojik kontaminasyon seviyesinin değerlendirilmesini mümkün kılar. Bu gösterge, yoğun mikrobiyal kontaminasyonun acil tespiti için vazgeçilmezdir.

Toplam mikrobiyal sayı belirlenirken steril bir Petri kabına 1 ml test suyundan ilave edilir ve 10-12 ml ılık (44°C) erimiş nütrient agar dökülür. Besiyeri su ile nazikçe karıştırılır, homojen ve
bardağın dibine dağılan hava kabarcıkları olmadan, ardından bir kapakla kapatın ve katılaşmaya bırakın. Mahsuller bir termostatta 37 °C'de 24 saat kuluçkaya yatırılır. Her iki tabakta yetiştirilen toplam koloni sayısını sayın ve ortalama değeri belirleyin. Nihai sonuç, 1 ml test suyundaki koloni oluşturan birimlerin (CFU) sayısı olarak ifade edilir. 1 ml içme suyu 50 CFU'dan fazla içermemelidir.

BGKP'un tanımı
Aynı zamanda yaygın koliform bakterileri - OKB ve termotolerant koliform bakterileri - TKB belirlenir.

İçme suyu tayınlama ilkeleri

Aynısı diğer fincan içinde yapılır. Bir termostatta ekim, gün boyunca 37 ° C sıcaklıkta inkübe edilir. Daha sonra mikroskop altında çift büyütmede iki kapta gelişen toplam koloni sayısı sayılır ve ortalama değer belirlenir. 1 ml içme suyunda 50 CFU'dan fazla olmamalıdır.

OKB uluslararası bir niteliktir ve aşağıdakilere dahildir: büyük grup BGKP (Escherichia coli grubunun bakterileri). TCB'nin sudaki içeriği iki yöntemle belirlenebilir: membran filtre yöntemi ve titrasyon (fermantasyon) yöntemi.

Membran filtre yöntemi ile suyun incelenmesi. Yöntem, belirli bir hacimdeki suyun membran filtrelerden süzülmesine, ekinlerin ayırıcı tanı ortamında yetiştirilmesine ve ardından kolonilerin kültürel ve biyokimyasal özelliklere göre tanımlanmasına dayanır.

Su çalışması için titrasyon yöntemi. Yöntem, belirli bir hacimdeki suyun bir sıvı besin ortamına aşılanmasından sonra bakteri birikimine, ardından ayırıcı bir teşhis ortamına yeniden aşılamaya ve kolonilerin kültürel ve biyokimyasal testlerle tanımlanmasına dayanır.
"Koliform organizmalar", alt karın bölgesinde yaşayan ve çoğalan gram negatif, çubuk şeklindeki bir bakteri sınıfına aittir. sindirim yolu insan ve birçok sıcakkanlı hayvan gibi - hayvancılık ve asit, gaz ve aldehit oluşumu ile 35-37 0C'de laktozu fermente edebilen su kuşları. Dışkı atıklarıyla birlikte suda bir kez, büyük çoğunluğu üreme yeteneğinden yoksun olsa da, birkaç hafta hayatta kalabilirler.

Son araştırmalara göre, genellikle bu sınıfa atfedilen Escherichia (E.Coli), Citrobacter, Enterobacter ve Klebsiela bakterileriyle birlikte, laktozu fermente edebilen Enterobacter cloasae ve Citrobadter freundii bakterileri de bu sınıfa aittir. Bu bakteriler sadece dışkıda değil, aynı zamanda çevrede ve hatta nispeten yüksek besin konsantrasyonuna sahip içme suyunda da bulunabilir. Buna ek olarak, dışkıda nadiren bulunan veya bulunmayan ve oldukça iyi kalitede suda üreyebilen türler de buna dahildir.

TKB - ısıya dayanıklı koliform bakteriler. TCB sayısı, su kütlelerindeki suyun fekal kontaminasyon derecesini karakterize eder ve dolaylı olarak bağırsak enfeksiyonlarının patojenleriyle ilgili salgın tehlikesini belirler. TKB, BGKP (OKB) ile aynı yöntemlerle belirlenir.
Sıhhi ve mikrobiyolojik çalışmalar için numune alma, sterilite kurallarına ve ilgili düzenleyici belgeler tarafından incelenen her nesne için düzenlenmiş gerekli tüm koşullara uygun olarak yapılmalıdır.

Örnekleme hataları yanlış sonuçlara yol açar. Numuneleri paketlerken ve taşırken, incelenen nesnedeki orijinal mikrobiyotanın ölümünü veya üremesini dışlayan koşullar yaratmak gerekir. Bu nedenle toplanan numuneler en kısa sürede analiz için laboratuvara ulaştırılmalıdır.