Câu hỏi cho một nhà tâm lý học 

Xác định okb tkb trong nước uống. Nghiên cứu vi sinh vật nước


Yêu cầu vệ sinh đối với chất lượng nước phục vụ nhu cầu ăn uống và sinh hoạt dựa trên nguyên tắc tập trung vào chất lượng nước, điều kiện sống và sức khỏe của con người phụ thuộc vào đó. Theo luật vệ sinh hiện đại, nước uống phải an toàn về dịch bệnh và bức xạ, vô hại về Thành phần hóa học và có đặc tính cảm quan thuận lợi.

Độ an toàn của nước uống trong điều kiện dịch bệnh được xác định bằng việc tuân thủ các tiêu chuẩn về chỉ số vi sinh. Thành phần vi sinh của nước uống là chỉ số chính về chất lượng và sự phù hợp để tiêu thụ. Điều này có tính đến cả ô nhiễm vi khuẩn và virus.

An toàn dịch tễ học của nước uống tại SanPiN được đánh giá bằng một số chỉ số. Một vai trò quan trọng trong số đó được gán cho coliforms chịu nhiệt như là chỉ số thực sự về ô nhiễm phân và tổng số coliforms.

Vi khuẩn coliform thông thường (CBC) là những hình que gram âm, oxidase âm tính, không tạo bào tử, có thể phát triển trên môi trường lactoza khác biệt, lên men lactoza thành axit và khí ở nhiệt độ +37 trong 24-48 giờ.

Vi khuẩn coliform chịu nhiệt (TCB) là một phần của OKB và có tất cả các đặc điểm của chúng, nhưng không giống như chúng, chúng có thể lên men đường sữa thành axit, aldehyde và khí ở nhiệt độ +44 trong 24 giờ. Do đó, TKB khác với OKB ở khả năng lên men đường sữa thành axit và khí ở nhiệt độ cao hơn. Coliform chịu nhiệt và coliform thông thường không được có trong 100 ml nước uống (trong bất kỳ mẫu nào có phép phân tích lặp lại ba lần).

Trong mạng lưới phân phối của hệ thống cấp nước uống tập trung lớn (với số lượng mẫu nghiên cứu ít nhất 100 mẫu/năm) cho phép có 5% mẫu không đạt tiêu chuẩn đối với coliform thông thường, nhưng không lấy hai mẫu liên tiếp tại một điểm.

Tổng số vi sinh vật (tổng số vi sinh vật - TMC) được xác định bằng cách sinh trưởng trên thạch thịt-peptone ở nhiệt độ ủ là 37. Chỉ tiêu này dùng để đặc trưng cho hiệu quả lọc nước uống, phải được xem xét khi giám sát chất lượng nước trong động lực học. Độ lệch mạnh của TMF ngay cả trong giới hạn của giá trị tiêu chuẩn (nhưng không quá 50 trong 1 ml) là tín hiệu vi phạm công nghệ xử lý nước. Sự phát triển của TMP trong nước của mạng lưới phân phối có thể cho thấy tình trạng vệ sinh không thuận lợi của nó, góp phần sinh sản vi sinh vật do tích tụ các chất hữu cơ hoặc rò rỉ dẫn đến hút nước ngầm bị ô nhiễm.

Thực vật hoại sinh hiếu khí chỉ là một phần của Tổng số vi khuẩn trong nước, nhưng là một chỉ số vệ sinh quan trọng về chất lượng nước, vì giữa mức độ ô nhiễm của nó chất hữu cơ và số lượng vi sinh vật có một mối quan hệ trực tiếp. Ngoài ra, người ta tin rằng tổng số vi sinh vật càng cao thì càng có nhiều khả năng có vi sinh vật gây bệnh trong nước. Số lượng vi sinh vật trong nước máy không được vượt quá 100.

Độ an toàn của nước uống theo nghĩa dịch bệnh được xác định bằng việc tuân thủ các tiêu chuẩn về chỉ số vi sinh (Bảng 1).

Bảng 1. Các chỉ tiêu vi sinh của nước ăn uống

Khái niệm về vi sinh vật chỉ định vệ sinh

Các yêu cầu chính đối với vi sinh vật chỉ thị vệ sinh: 1. Chúng phải có môi trường sống tự nhiên chung với các vi sinh vật gây bệnh và được thải ra môi trường bên ngoài trong Với số lượng lớn; 2 trong môi trường bên ngoài môi trường sống, các vi sinh vật chỉ định vệ sinh phải được phân bố đồng đều nhất có thể và có khả năng chống chịu cao hơn các vi sinh vật gây bệnh. Chúng nên ở trong nước lâu hơn, thực tế không nhân lên, có khả năng chống lại các yếu tố bất lợi khác nhau, chúng sẽ ít thay đổi về tính chất và đặc điểm hơn; 3. Phương pháp xác định vi sinh vật chỉ định vệ sinh phải đơn giản và đủ độ tin cậy.

Từ quan điểm của vi sinh vật học vệ sinh, đánh giá chất lượng nước được thực hiện để xác định mức độ nguy hiểm hoặc an toàn vệ sinh và dịch tễ học của nó. Đối với sức khỏe con người. chơi nước vai trò quan trọng trong việc truyền mầm bệnh của nhiều bệnh nhiễm trùng, chủ yếu là đường ruột.

Việc xác định định lượng trực tiếp tất cả các bệnh nhiễm trùng để kiểm soát chất lượng nước là không khả thi do sự đa dạng về chủng loại của chúng và sự phức tạp của phân tích.

Việc phân tích chỉ một mẫu nước để tìm sự hiện diện có thể có của các mầm bệnh sốt thương hàn, phó thương hàn A, phó thương hàn B, kiết lỵ, vàng da truyền nhiễm, sốt nước và bệnh sốt thỏ trong đó sẽ khiến toàn bộ nhân viên của một phòng thí nghiệm vi khuẩn lớn phải làm việc nặng nhọc. Ngoài ra, câu trả lời trong trường hợp này sẽ chỉ được đưa ra sau 2-3 tuần, tức là khi dân số đã uống nước được nghiên cứu trong một thời gian dài.

Xét thấy sự thiếu hiệu quả rõ ràng của một định nghĩa chi tiết về sự an toàn của nước, ngay cả trong cuối thế kỷ XIX Trong nhiều thế kỷ, người ta đã cố gắng thay thế việc tìm kiếm tất cả các vi khuẩn gây bệnh dưới nước bằng một loại vi khuẩn duy nhất, mặc dù không gây bệnh nhưng thường xuyên có trong phân người. Sau đó, có thể coi rằng nếu nước đang nghiên cứu thực sự bị nhiễm phân, thì nó có thể gây nguy hiểm khi uống, vì cả người bệnh và người mang vi khuẩn có thể được tìm thấy trong cộng đồng khỏe mạnh. Việc tìm kiếm các chỉ số vi khuẩn về ô nhiễm phân như vậy đã thành công. Hóa ra ba trong số các vi khuẩn sau đây thường xuyên có mặt trong phân người: 1) Escherichia coli; 2) cầu khuẩn đường ruột; 3) vi khuẩn sinh nha bào kỵ khí, chủ yếu là Bac. perfingens.

Như vậy, E. coli chiếm ưu thế trong nước thải sinh hoạt. Nhưng nó không chỉ là cô ấy thêm nội dung. Giá trị chính của chỉ thị vi khuẩn về ô nhiễm phân nằm ở chỗ tỷ lệ tử vong của hầu hết các vi khuẩn gây bệnh. Chỉ khi điều kiện này được đáp ứng, vi khuẩn thường xuyên hiện diện trong phân người sẽ là dấu hiệu cho thấy phân bị nhiễm bẩn.

Nếu chúng ta tiếp cận những cư dân thường trú được phát hiện trong ruột theo quan điểm này, chúng ta sẽ tìm thấy những điều sau: vi khuẩn thuộc nhóm Bac. perfingens tồn tại trong nước lâu hơn nhiều so với vi khuẩn gây bệnh; ngược lại, enterococci chết sớm hơn nhiều; đối với Escherichia coli, thời gian bảo quản trong nước xấp xỉ với thời gian tồn tại của vi khuẩn gây bệnh.

Do đó, chỉ số vệ sinh-vi khuẩn chính của nước là Escherichia coli. Chỉ ở Nga, quốc gia duy nhất trên thế giới, chất lượng nước được kiểm soát bởi vi khuẩn thuộc nhóm Escherichia coli (chỉ số BGKP). Nhóm này bao gồm tất cả các đại diện của nhóm vi khuẩn đường ruột và các đại diện cơ hội.

Theo GOST 2874-73 và GOST 18963-73, vi khuẩn thuộc nhóm Escherichia coli (ECG) bao gồm trực khuẩn gram âm, không tạo bào tử lên men đường sữa hoặc glucose thành axit và khí ở 37 ° trong 24 giờ và làm không có hoạt tính oxidase. CGB bao gồm đại diện của nhiều chi khác nhau - Escherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, nhưng tất cả chúng đều được thải ra môi trường từ ruột của người và động vật. Vì lý do này, khám phá của họ trong Môi trường nên được coi là một chỉ số về ô nhiễm phân.

Trong số các chi có trong BGKP, chi Escherichia có giá trị chỉ định và vệ sinh cao nhất. Sự hiện diện của tất cả các vi khuẩn này trong môi trường được coi là ô nhiễm phân tươi.

Escherichia - là một trong những loài nền của ruột người và động vật. Chi Escherichia, bao gồm loài E. coli, chỉ thị nhiễm phân tươi, lý do có thể nhiễm độc. Đại diện của chi trong nước được coi là vi khuẩn coliform chịu nhiệt.

Citrobacter - sống trong nước thải, đất và các vật thể môi trường khác, cũng như trong phân của bệnh nhân khỏe mạnh và AII. Chúng thuộc nhóm vi khuẩn cơ hội. (Từ điển vi sinh-sách tra cứu, 1999)

Những nhược điểm của citrobacter như SPMO bao gồm:

1. sự phong phú của các chất tương tự trong môi trường bên ngoài.

2. sự thay đổi của môi trường bên ngoài.

3. không đủ khả năng chống lại các tác động bất lợi.

4. khả năng sinh sản ở nước.

5. chỉ báo mờ ngay cả khi có sự hiện diện của salmonella.

Nghiên cứu những năm gần đây tiết lộ sự vắng mặt của mối tương quan trực tiếp giữa sự hiện diện của vi khuẩn gây bệnh và các chỉ số trong nước. Ở những khu vực có áp lực nhân tạo mạnh mẽ đối với vùng nước có sự giảm hàm lượng vi sinh vật chỉ thị với sự thay đổi về đặc tính sinh học và văn hóa của chúng so với nền tảng chiếm ưu thế về số lượng của vi khuẩn gây bệnh và gây bệnh tiềm tàng.

Enterobacter - sống trong ruột người và các động vật khác, được tìm thấy trong đất, nước, sản phẩm thực phẩm, chữa các bệnh đường ruột, niệu sinh dục, hô hấp, viêm mủ ở người.

Klebsiella - sống trong nước, đất, thức ăn, trong ruột và đường hô hấp của người, động vật có vú, chim.

Năm 1910 Enterococci (Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium) đã được đề xuất cho vai trò của SPMO.

Enterococci là một chi vi khuẩn gram+ kỵ khí sinh bào tử kỵ khí tùy ý. Các tế bào là đa hình. Phân bố rộng rãi trong tự nhiên. Chúng là một trong những loài nền trong ruột người, động vật có vú, chim. Thường được tìm thấy trong hệ thực vật của da đáy chậu và đường sinh dục, khoang mũi, hầu họng, mũi. Tồn tại lâu trong đất, thực phẩm.

Lợi ích của Enterococcus như SPMO:

1. thường xuyên ở trong ruột người và liên tục thải ra môi trường bên ngoài. Đồng thời, Enterococcus faecalis chủ yếu sống trong ruột người nên việc phát hiện ra nó cho thấy nhiễm phân người. Ở mức độ thấp hơn, Enterococcus faecium xảy ra ở người. Loại thứ hai chủ yếu được tìm thấy trong ruột của động vật, mặc dù Enterococcus faecalis cũng tương đối hiếm.

2. Không có khả năng sinh sản ở ngoại cảnh, Enterococcus faecium sinh sản chủ yếu nhưng ít có ý nghĩa dịch tễ học.

3. không bị thay đổi tính chất ở ngoại cảnh.

4. không có chất tương tự trong môi trường bên ngoài.

5. chống lại các ảnh hưởng xấu của môi trường. Enterococcus có khả năng kháng clo gấp 4 lần so với Escherichia coli. Đây là công lao chính của anh ấy. Do đặc điểm này, enterococcus được sử dụng để kiểm tra chất lượng clo hóa nước, cũng như một chỉ số về chất lượng khử trùng. Chịu được nhiệt độ 60 ° C, cho phép nó được sử dụng như một chỉ số về chất lượng thanh trùng. chịu được nồng độ muối thông thường 6,5-17%. Chịu được độ pH trong khoảng 3-12.

6. Môi trường có tính chọn lọc cao đã được phát triển để chỉ định enterococci. Tỷ lệ sống sót của Enterococcus trong nước tiếp cận với Enterobacteria gây bệnh. Enterococcus thực sự là xét nghiệm chỉ định vệ sinh thứ hai sau E. coli trong nghiên cứu về nước uống.

Hiện tại, phép đo đường ruột được hợp pháp hóa trong tiêu chuẩn nước quốc tế như một chỉ số về ô nhiễm phân tươi. Khi Escherichia coli không điển hình được tìm thấy trong nước, sự hiện diện của enterococci trở thành dấu hiệu chính cho thấy ô nhiễm phân mới. Thật không may, trong SanPiN 2.1.4.1074-01 dành cho nước uống, định nghĩa về enterococcus không được cung cấp.

Nhóm Proteus được coi là thủ phạm của các quá trình thối rữa trong tự nhiên, và do đó, là chỉ số cho thấy sự hiện diện của các chất hữu cơ trong nước của các hồ chứa. Điều này áp dụng chủ yếu cho một loài - Pr. Vulgaris; loài thứ hai - Pr.mirabilis - là cư dân trong ruột của người và động vật. Sự khác biệt về sinh thái này giúp có thể đánh giá bản chất của ô nhiễm nước và mức độ an toàn dịch bệnh của nó. Pr.vulgaris có thể là một chỉ số ô nhiễm phân, Pr.vulgaris - một chỉ số về sự gia tăng nồng độ chất hữu cơ nói chung. mặt yếu chỉ báo này là sự hiện diện không liên tục của Pr.mirabilis trong ruột người và khả năng sinh sản khá mạnh của cả hai loài trong nước. Cũng không có phương pháp nghiên cứu nào cho phép tính đến cả hai loài một cách khác biệt khi chúng đồng thời có mặt trong mẫu thử nghiệm. Phương pháp đề xuất không hoàn thành nhiệm vụ này.

Hiện nay người ta đã chứng minh rằng vi khuẩn thuộc chi Proteus được tìm thấy trong 98% trường hợp trong dịch tiết đường ruột của người và động vật, trong đó 82% trường hợp là Pr.mirabilis. phát hiện proteus trong nước cho thấy vật thể bị nhiễm bẩn với chất nền đang phân hủy và cho thấy các vấn đề nghiêm trọng về vệ sinh. Proteometry được chính thức công nhận tại Hoa Kỳ.

Việc xác định bào tử của clostridia khử sunfua được thực hiện trên đường ống dẫn nước từ nguồn bề mặtđể đánh giá hiệu quả xử lý nước công nghệ. Không được có bào tử của vi khuẩn khử sunfua trong 20 ml nước uống sau khi xử lý nước xong.

Là một chỉ số về sự ô nhiễm vi rút trong nước uống, SanPiN bao gồm coliphages, gần giống với vi rút đường ruột nhất về nguồn gốc sinh học, kích thước, tính chất, khả năng chống lại các yếu tố môi trường. Coliphages không được phát hiện trong 100 ml nước uống đã qua xử lý.



Uống nước

Sự không phù hợp của nước, cũng như hóa chất, khiến nó không thể uống được. Nếu nguồn nước của bạn không được bảo vệ khỏi tác động trực tiếp hệ thống môi trường hoặc tiện ích đã lỗi thời hoặc lâu ngày không được vệ sinh, thì việc thực hiện xét nghiệm vi sinh là điều cần thiết. Sức khỏe và sự an toàn của bạn phụ thuộc vào nó! Điều này đặc biệt quan trọng đối với những người sử dụng giếng. - đất, nó tiếp xúc trực tiếp với đất, có nghĩa là nó có nguy cơ “uống” bạn nitrat, kim loại nặng, amoniac và tất nhiên là các chất hữu cơ có hại xâm nhập vào đất do hoạt động của các trang trại hoặc vùng đất nông nghiệp.

Bảng 1 thể hiện các chỉ tiêu vi sinh của tiêu chuẩn hiện hành SanPiN 2.1.4.1074-01 cho nước uống:

Bảng 1. Tiêu chuẩn vi sinh đối với nước ăn uống

Phân tích vi sinh tiêu chuẩn

Phân tích vi sinh tiêu chuẩn của nước uống tại Đại học quốc gia Moscow bao gồm việc xác định ba chỉ số: tổng số vi sinh vật, tổng số coliform và vi khuẩn coliform chịu nhiệt.

Phân tích vi sinh nâng cao

Một phân tích vi sinh mở rộng về nước bao gồm phân tích năm chỉ số: tổng số vi khuẩn, tổng số vi khuẩn coliform, số lượng vi khuẩn coliform chịu nhiệt, hiệu giá coliphage và hàm lượng bào tử của vi khuẩn khử sulfit.

Phân tích vi sinh các vùng nước mặt (ao, sông, hồ)

Thường có những vùng nước trên địa điểm của chúng tôi hoặc gần đó, nơi chúng tôi và con cái của chúng tôi thích dành thời gian vui vẻ. Tất nhiên, nước trong các hồ chứa này không thể uống được, nhưng sự an toàn của nó đối với con người, cũng như việc uống, đã được quy định. Bảng 2 trình bày các chỉ tiêu vi sinh của tiêu chuẩn hiện hành đối với yêu cầu vệ sinhđể bảo vệ Nước ờ bề mặt(SanPiN 2.1.5.980-00)

Bảng 2. Các tiêu chuẩn vi sinh đối với việc sử dụng nước giải trí, cũng như trong phạm vi ranh giới của các khu dân cư

Phân tích vi sinh tiêu chuẩn (nước mặt)

Phân tích vi sinh của nước không dùng để uống bao gồm việc xác định số lượng của hai chỉ số: tổng số coliform và vi khuẩn chịu nhiệt coliform.

Phân tích vi sinh nâng cao (nước mặt):

Ngoài hai chỉ số chính, chúng tôi đề xuất tiến hành phân tích bổ sung cho nội dung: coliphages, nấm men cơ hội và micromycetes (vệ tinh thường xuyên của các bệnh cơ hội) và chỉ số tự làm sạch của hồ chứa.

Xác định vi khuẩn thuộc chi Salmonella và chi Enterococcus

Với sự vượt quá đáng kể so với tiêu chuẩn SanPiN 2.1.5.980-00, cũng như khả năng hồ chứa bị nhiễm phân, chúng tôi đề xuất tiến hành phân tích sự hiện diện của mầm bệnh nhiễm trùng đường ruột(chi Salmonella và Enterococcus).

Bảng chú giải

Tổng lượng vi sinh vật dồi dào (TMC)

Phương thức định nghĩa trong uống nước tổng số vi sinh vật ưa khí trung bình và kỵ khí tùy ý (FMA) có khả năng sinh sống trên môi trường thạch dinh dưỡng ở 37°C trong 24 giờ, có thể nhìn thấy ở mức tăng gấp 2 lần. Chỉ số này xác định vi khuẩn tiềm ẩn có thể gây hại cho sức khỏe con người.

Vi khuẩn coliform thông thường (TCB)

Vi khuẩn coliform thông thường (CBC) là những hình que gram âm, oxidase âm tính, không tạo bào tử, có thể phát triển trên môi trường lactoza khác biệt, lên men lactoza thành axit, aldehyde và khí ở nhiệt độ (37 + 1) ° C cho ( 24-48) giờ. Nhiều thành viên của nhóm này là vi sinh vật hệ vi sinh bình thường dạ dày, do đó, sự dư thừa của nhóm vi sinh vật này có thể cho thấy khả năng ô nhiễm nước (bao gồm cả phân) do con người gây ra.

Vi khuẩn coliform chịu nhiệt (TCB)

Vi khuẩn coliform chịu nhiệt (TCB) là một trong những loại vi khuẩn coliform phổ biến, có tất cả các đặc điểm của chúng và ngoài ra, có thể lên men đường sữa thành axit, aldehyde và khí ở nhiệt độ (44 ± 0,5) ° C trong 24 giờ. Cũng như OKB, chúng là một nhóm chỉ thị, tuy nhiên, chúng ổn định hơn trong môi trường: đó là lý do tại sao việc phát hiện nhóm vi sinh vật này trong nước có thể cho thấy sự nhiễm bẩn rõ ràng của nó với các chất thải của con người.

trực khuẩn

Coliphages, được xác định bằng phương pháp tiêu chuẩn (MUK 4.2.1018-01), là vi rút E. coli (Escherichia coli) và được các nhà dịch tễ học coi là phương pháp bổ sung, và đôi khi nhạy hơn, trong việc xác định ô nhiễm nước do vi sinh vật E. coli. Các hạt vi-rút và đặc biệt là coliphages có khả năng chống lại môi trường tốt hơn so với vi khuẩn chủ của chúng. Về vấn đề này, sự hiện diện của coliphages có thể đóng vai trò là dấu hiệu đáng tin cậy về sự ô nhiễm phân cũ hơn của nguồn nước. Một mối tương quan trực tiếp đã được chỉ ra giữa hàm lượng coliphages trong nước và enterovirus nguy hiểm đối với con người, vì vậy sự hiện diện của coliphages trong nước có thể cho thấy nguồn nhiễm vi-rút. Tài liệu quy định hiện hành (SanPiN 2.1.4.1074-01) ngụ ý không có coliphages trong 100 ml nước.

Bào tử clostridia khử sulfit

Clostridia khử sulfite là các vi sinh vật kỵ khí hình que hình thành bào tử, chúng là một chỉ số vi sinh bổ sung về ô nhiễm phân của hồ chứa. Không giống như vi khuẩn coliform tương đối không ổn định và coliform chịu nhiệt, bào tử Clostridial có thể tồn tại trong các vùng nước. trong một khoảng thời gian dài. Clostridia được tìm thấy trong ruột của người và vật nuôi, tuy nhiên, nếu ăn phải với số lượng lớn trong nước, chúng có thể gây ngộ độc thực phẩm. Clostridia khử sulfite bao gồm các clostridium nguy hiểm cho con người (Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani) gây ra các bệnh nghiêm trọng. Theo tiêu chuẩn hiện hành (SanPiN 2.1.4.1074-01), không được có bào tử Clostridia trong 20 ml nước.

Nấm men cơ hội và micromycetes

Nấm men và micromycetes (nấm mốc) gây bệnh có điều kiện bao gồm một nhóm lớn các sinh vật nấm không đồng nhất có thể phát triển hoại sinh ở 37 °C. Nó bao gồm các đại diện như Candida albicans và Cryptococcus neoformans, là nhân tố thường xuyên gây ra các bệnh cơ hội ở người, gây ra bệnh nấm candida ( bệnh nấm da), bệnh tưa miệng, v.v. Các vi sinh vật micromycete khác (Cladosporium cladosporioides, Aspergillusniger) có thể là chất nhạy cảm tích cực của phản ứng dị ứng, và đôi khi chính chất gây dị ứng. Ở Liên bang Nga, nước không được tiêu chuẩn hóa đối với nấm mốc và nấm men trong nước.

Xác định chỉ số tự làm sạch (từ MUK 4.2.1884-04)

Tổng số vi sinh vật không được chuẩn hóa trong nước của các hồ chứa trong khu vui chơi giải trí, vì mức độ của nhóm vi sinh vật này chủ yếu phụ thuộc vào đặc điểm tự nhiên từng đối tượng, từng mùa, v.v.

Tuy nhiên, khi chọn một nguồn cấp nước mới hoặc một nơi giải trí trong nước của các hồ chứa, cần phải xác định thêm tổng quần thể vi sinh vật phát triển:

  • ở nhiệt độ 37°C trong 24 giờ;
  • ở 22°C trong 72 giờ.

Nó được cho rằng:

  1. TMC ở 37 ° C được trình bày hầu hết hệ vi sinh vật alochthonous (được đưa vào hồ chứa do ô nhiễm do con người gây ra, bao gồm cả ô nhiễm phân);
  2. TMP ở 20-22 ° C được thể hiện, ngoài hệ vi sinh vật bản địa, alochthonous (tự nhiên, đặc trưng của hồ chứa này).

Tỷ lệ số lượng của các nhóm vi sinh vật này giúp đánh giá cường độ của quá trình tự làm sạch. Khi kết thúc quá trình tự làm sạch, hệ số OMC là 22°C/OMC 37°C. Ở những nơi bị ô nhiễm bởi nước thải sinh hoạt, các giá trị số của cả hai nhóm gần nhau.

Chỉ số cho phép bạn có được Thông tin thêm về điều kiện vệ sinh của các vùng nước, nguồn gây ô nhiễm, quá trình tự làm sạch.

8.1. Xác định tổng số vi sinh vật hình thành khuẩn lạc trên thạch dinh dưỡng

8.1.1. Định nghĩa khái niệm chỉ tiêu

Phương pháp này xác định trong nước uống tổng số vi sinh vật ưa khí trung bình và kỵ khí tùy ý (FMC) có khả năng hình thành khuẩn lạc trên thạch dinh dưỡng ở nhiệt độ 37°C trong 24 giờ, có thể nhìn thấy với mức tăng gấp 2 lần.

8.1.2. Thực hiện phân tích

Từ mỗi mẫu, ít nhất hai thể tích 1 ml được cấy.

Sau khi trộn kỹ, mẫu nước được thêm 1 ml vào đĩa Petri vô trùng, mở nhẹ nắp. Sau khi thêm nước, (8-12) ml (mỗi cốc có đường kính 90-100 mm) thạch dinh dưỡng nóng chảy và được làm lạnh đến (45-49) ° C được đổ vào từng cốc sau khi hơ mép đĩa trong mà nó được chứa. Sau đó nhanh chóng trộn lượng chứa trong cốc, phân bổ đều trên toàn bộ đáy, tránh tạo bọt khí, để thạch bám vào mép và nắp cốc. Quy trình này được thực hiện trên bề mặt nằm ngang, nơi các đĩa được để yên cho đến khi thạch đông lại.

Thạch nóng chảy trong giai đoạn phân tích được đặt trong nồi cách thủy hoặc máy điều nhiệt duy trì nhiệt độ (45-49) °C.

Sau khi thạch đông lại, các đĩa có dịch cấy được đặt lộn ngược trong máy điều nhiệt và ủ ở nhiệt độ (37 ± 1)°C trong (24 ± 2) giờ.

8.1.3. kết quả chẵn

Đếm tất cả các khuẩn lạc mọc trên đĩa, quan sát ở độ phóng đại 2 lần. Chỉ tính đến những đĩa có không quá 300 khuẩn lạc biệt lập mọc trên đó.

Số lượng khuẩn lạc trên cả hai đĩa được cộng lại và chia đôi. Kết quả được biểu thị bằng số lượng đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) trong 1 ml mẫu nước thử nghiệm.

Nếu không thể đếm trên một trong 2 đĩa, thì kết quả được đưa ra dựa trên số lượng khuẩn lạc trên một đĩa. Nếu hai đĩa cho thấy khuẩn lạc mọc lan tỏa không bao phủ toàn bộ bề mặt đĩa hoặc có hơn 300 khuẩn lạc mọc và không thể lặp lại xét nghiệm, hãy đếm khu vực của đĩa và sau đó tính toán lại toàn bộ bề mặt. Trong những trường hợp này, giao thức ghi chú “số lượng CFU / ml - xấp xỉ”.

Nếu không thể đếm khuẩn lạc trên các đĩa, hãy ghi lại "sự phát triển liên tục" trên quy trình.

8.2. Xác định vi khuẩn coliform phổ biến và chịu nhiệt bằng màng lọc (phương pháp chính)

8.2.1. Định nghĩa khái niệm chỉ tiêu

Vi khuẩn coliform thông thường (CBC) là Gram âm, oxidase âm tính, không hình thành bào tử, có khả năng phát triển trên môi trường lactoza khác biệt, lên men lactoza thành axit, aldehyde và khí ở nhiệt độ (37 ± 1) °C cho ( 24-48) h .

Vi khuẩn coliform chịu nhiệt (TCB) là một trong những loại vi khuẩn coliform phổ biến, có tất cả các đặc điểm của chúng và ngoài ra, có thể lên men đường sữa thành axit, aldehyde và khí ở nhiệt độ (44 ± 0,5) °C trong 24 giờ.

8.2.2. nguyên tắc phương pháp

Phương pháp này dựa trên việc lọc một lượng nước nhất định qua các bộ lọc màng, trồng trọt trên môi trường dinh dưỡng khác biệt với đường sữa và sau đó xác định các khuẩn lạc bằng các đặc tính nuôi cấy và sinh hóa.

8.2.3. Thực hiện phân tích

8.2.3.1. trình tự nghiên cứu

Trong nghiên cứu về nước uống, 3 thể tích 100 ml được phân tích.

Nếu thu được kết quả âm tính ổn định, có thể lọc 300 ml nước qua một bộ lọc.

Khi lọc nước chưa rõ chất lượng, nên tăng số thể tích lọc để thu được khuẩn lạc phân lập trên màng lọc (ví dụ: 10, 40, 100, 150 ml nước).

Thể tích nước đo được được lọc qua các bộ lọc màng tuân thủ các yêu cầu được nêu trong đoạn 7.

Các bộ lọc được đặt trên môi trường Endo được chuẩn bị theo đoạn 5.4. Các cốc có bộ lọc được đặt lộn ngược trong máy điều nhiệt và ủ ở nhiệt độ (37 ± 1) °C trong (24 ± 2) giờ.

Nếu không có sự phát triển trên các bộ lọc hoặc các khuẩn lạc có màng, xốp, mốc, trong suốt, không rõ ràng, chúng sẽ đưa ra câu trả lời âm tính: không có OKB và TKB trong 100 ml nước thử nghiệm. Việc phân tích được hoàn thành sau 24 giờ.

Nếu phát hiện thấy các khuẩn lạc dương tính với lactoza điển hình mọc trên các màng lọc: màu đỏ đậm, đỏ có hoặc không có ánh kim loại hoặc các loại khuẩn lạc tương tự khác có dấu trên mặt trái lọc, đếm riêng số lượng khuẩn lạc từng loại và tiến hành khẳng định thuộc OKB, TKB.

Để xác nhận sự hiện diện của OKB, hãy kiểm tra:

Tất cả các khuẩn lạc nếu ít hơn 5 khuẩn lạc mọc trên màng lọc;

Ít nhất 3-4 khuẩn lạc mỗi loại.

Để xác nhận sự hiện diện của TKB, tất cả các khuẩn lạc điển hình đều được kiểm tra, nhưng không quá 10.

Mỗi thuộc địa cô lập đã chọn được kiểm tra:

Sự hiện diện của hoạt động oxydase;

Liên kết Gram (kính hiển vi của chế phẩm nhuộm Gram hoặc xét nghiệm Gregersen);

Lên men đường lactoza thành axit và khí.

8.2.3.2. Thiết lập một thử nghiệm oxyase

Một dải giấy lọc được đặt trong đĩa Petri sạch và được làm ẩm bằng 2-3 giọt thuốc thử oxidase theo đoạn 5.7. Hệ thống giấy thành phẩm được làm ẩm bằng nước cất. Một phần của khuẩn lạc được phân lập bằng một cặp thủy tinh hoặc vòng bạch kim (vòng kim loại nichrom có ​​thể cho phản ứng dương tính giả) được cấy lên giấy lọc đã chuẩn bị. Phản ứng được coi là dương tính nếu màu nâu tím (mục 5.7.1 tùy chọn 1) hoặc màu xanh lam (mục 5.7.2 tùy chọn 2 và NIB oxidase) của nét vẽ xuất hiện trong vòng 1 phút. Với phản ứng âm tính, màu sắc tại vị trí ứng dụng của nền văn hóa không thay đổi. Với kết quả khả quan, thuộc địa này bị loại khỏi nghiên cứu tiếp theo.

Nếu khi kiểm tra các khuẩn lạc nhuộm màu đỏ sẫm, thu được kết quả không đủ rõ ràng, thì cần chuyển dịch cấy từ môi trường Endo sang thạch dinh dưỡng. Sau khi ủ, thử nghiệm được lặp lại.

8.2.3.3. Xác định thuộc Gram

Một vết phết được lấy từ khuẩn lạc âm tính với oxidase, nhuộm Gram và kiểm tra bằng kính hiển vi.

Trên một phiến kính đã khử chất béo bằng cồn, nhỏ 1 giọt nước cất vào một vòng lặp, một lượng nhỏ dịch cấy từ khuẩn lạc được phân tích được thêm vào và trải đều trên bề mặt của kính. Vết bôi được làm khô ở nhiệt độ phòng và cố định ba lần qua ngọn lửa của đèn đốt. Một dải giấy lọc được áp dụng cho quá trình chuẩn bị và đổ dung dịch carbolic của long đởm tím lên đó trong (0,5-1) phút, loại bỏ giấy, đổ dung dịch Lugol trong (0,5-1) phút, để ráo dung dịch Lugol và kính được rửa trong cồn etylic trong (0,5-1) phút, cho đến khi thuốc nhuộm ngừng chảy ra. Sau đó, kính được rửa kỹ bằng nước và nhuộm trong (1-2) phút bằng Ziel's fuchsin, pha loãng 1:10 với nước cất. Sau khi rửa và làm khô chế phẩm, vết bẩn được kiểm tra bằng kính hiển vi.

Việc chuẩn bị thuốc thử để nhuộm Gram được mô tả trong Phần 5.9.

Vi sinh vật Gram âm có màu hồng, Gram dương có màu xanh lam. Vi khuẩn Coliform là vi khuẩn gram âm.

Vết Gram có thể được thay thế bằng xét nghiệm Gregersen, không yêu cầu sử dụng quang học.

Thử nghiệm của Gregersen: trong một giọt dung dịch KOH 3% trên phiến kính, một khối vi khuẩn được lấy từ môi trường rắn được nhũ hóa. Sau một vài giây khuấy bằng vòng lặp, huyền phù trở nên nhầy và các sợi nhầy kéo dài phía sau vòng lặp, điều này cho thấy rằng vi khuẩn hoặc khuẩn lạc thử nghiệm thuộc về loài gram âm. Ở vi khuẩn gram dương, các sợi nhầy không được hình thành - phản ứng là âm tính.

8.2.3.4. Xác định quá trình lên men lactoza

Phần còn lại của khuẩn lạc gram âm phân lập có oxidaza âm được cấy song song vào hai ống nghiệm với môi trường lactoza (tr. 5.6):

Để xác nhận sự hiện diện của OKB, dịch cấy được ủ ở nhiệt độ (37 ± 1) °C trong 48 giờ;

Để xác nhận sự hiện diện của TKB, quá trình cấy được thực hiện trong môi trường đã được làm nóng trước ở nhiệt độ (43-44) °C và được ủ ở nhiệt độ (44 ± 0,5) °C trong 24 giờ.

Có thể xác định sơ bộ sự hình thành axit và khí trên môi trường xác nhận bán lỏng và NIB (phần 5.6) sau (4-6) giờ. Nếu phát hiện axit và khí, câu trả lời là dương tính. Trong trường hợp không có axit và khí hoặc chỉ có axit, các ống có nuôi cấy để đếm TKB cuối cùng được để đến 24 giờ. còn lại để đếm cuối cùng lên đến 48 giờ.

Nếu khuẩn lạc cần kiểm tra có kích thước nhỏ, thì cấy truyền trên thạch dinh dưỡng nghiêng và sau khi ủ trong (18-24) giờ, thực hiện tất cả các xét nghiệm khẳng định cần thiết.

8.2.3.5. Thực hiện các xét nghiệm xác nhận trong lớp phủ khuẩn lạc hoặc tăng trưởng liên tục

Nếu quan sát thấy các khuẩn lạc hoặc sự phát triển liên tục trên một phần hoặc toàn bộ bề mặt bộ lọc, hãy thực hiện phép thử oxidase bằng cách đặt màng lọc lên một vòng tròn giấy lọc có đường kính lớn hơn bộ lọc, được làm ẩm nhiều bằng thuốc thử hoặc trên NIB oxidase đĩa được làm ẩm bằng nước cất. Khi các dấu hiệu đầu tiên của phản ứng xuất hiện, nhưng không quá 5 phút sau, màng lọc được chuyển trở lại môi trường Endo. Sau một biểu hiện rõ ràng của phản ứng, kết quả được xác định. Nếu màu nâu tím hoặc xanh lam xuất hiện (tùy thuộc vào thuốc thử được sử dụng), xét nghiệm oxidase được coi là dương tính.

Nếu tất cả các khuẩn lạc trên các bộ lọc đều dương tính với oxidase, chúng sẽ không được tính đến và đưa ra phản hồi về việc không có OKB và TKB và hoàn thành phân tích.

Trong trường hợp phản ứng oxidase âm tính, quá trình sàng được thực hiện cho đến khi thu được các khuẩn lạc tách biệt và thuộc OKB và TKB của chúng được xác nhận theo đoạn 8.2.3.3-8.2.3.4 (phân tích định tính).

8.2.4. Kế toán kết quả

8.2.4.1. Các khuẩn lạc gram âm được tính là TBC đối với xét nghiệm oxidase âm tính và quá trình lên men lactoza ở 37°C để tạo ra axit và khí.

Các khuẩn lạc gram âm được tính là TKB trong phép thử oxidase âm tính và lên men lactoza ở 44°C có tạo ra axit và khí.

8.2.4.2. Trong trường hợp không có vi khuẩn coliform phổ biến và chịu nhiệt trên tất cả các bộ lọc, kết quả được ghi là “không có CFU của TCB trong 100 ml” và “không có CFU của TCB trong 100 ml”.

8.2.4.3. Trong trường hợp xác định tất cả các khuẩn lạc nghi ngờ mọc lên, số lượng đơn vị TKB và TKB hình thành khuẩn lạc được đếm trên tất cả các bộ lọc và kết quả phân tích CFU được biểu thị bằng 100 ml nước.

Việc tính toán được thực hiện theo công thức:

X là số khuẩn lạc trong 100 ml;

lượng nước được lọc qua các bộ lọc mà tài khoản được lưu giữ;

a là tổng số khuẩn lạc đếm được trên các màng lọc này.

1. Khi cấy vào 3 màng lọc của 100 ml, có 2 khuẩn lạc mọc trong 100 ml, không có khuẩn lạc mọc ở 2 màng lọc còn lại. Số lượng coliform tổng số hoặc chịu nhiệt sẽ là:

CFU OKB (TKB) trong 100 ml

2. Khi gieo 10, 40, 100 và 150 ml trên màng lọc có thể tích màng lọc là 40 ml thì mọc 4 khuẩn lạc riêng biệt, thể tích màng lọc là 100-3 OKB. Các bộ lọc có thể tích 10 ml và 150 ml bị phát triển quá mức và không được tính toán. Tổng số khuẩn lạc OKB (TKB) trên các màng lọc nơi thu được các khuẩn lạc tách biệt được tổng hợp và tính toán lại cho thể tích 100 ml.

CFU trong 100 ml

8.2.4.4. Nếu trong quá trình kiểm tra chọn lọc các khuẩn lạc cùng loại, thu được kết quả không bằng nhau thì số lượng OKB hoặc TKB giữa các khuẩn lạc thuộc loại này được tính theo công thức:

, ở đâu

X là số lượng xác định vi khuẩn cùng loại;

a là tổng số khuẩn lạc thuộc loại này;

- số lượng thử nghiệm;

c là số khuẩn lạc có kết quả dương tính.

Kết quả tính toán cho từng loại khuẩn lạc được tổng hợp và sau đó được tính toán theo điều 8.2.4.3-8.2.4.4.

8.2.4.5. Kết quả cuối cùng được đưa ra: số lượng CFU TCB trong 100 ml, trong đó số lượng CFU TCB trong 100 ml.

Một kết quả chỉ định có thể được đưa ra bằng cách phát hiện các khuẩn lạc coliform điển hình trên môi trường của Endo, được hình thành bởi vi khuẩn gram âm oxidase. Câu trả lời cuối cùng được xác nhận bởi kết quả của quá trình lên men đường sữa.

8.2.4.6. Khi xếp chồng các khuẩn lạc hoặc tăng trưởng liên tục trên tất cả các bộ lọc (mục 8.2.3.5), trong trường hợp xác nhận thuộc OKB và TKB, kết quả định tính “phát hiện OKB trong 100 ml” sẽ được đưa ra.

Nếu tất cả các khuẩn lạc trên bộ lọc đều dương tính với oxidase hoặc chúng không thuộc OKB và TKB thì quá trình phân tích đã hoàn tất, giao thức cho biết “bộ lọc chôn vùi”.

Trong cả hai trường hợp, phân tích được lặp lại.

8.3. Xác định vi khuẩn coliform thông thường và ưa nhiệt bằng phương pháp chuẩn độ

8.3.1. Định nghĩa khái niệm chỉ tiêu

Định nghĩa khái niệm chỉ tiêu OKB, TKB theo mục 8.2.1.

8.3.2. khu vực ứng dụng

Phương pháp chuẩn độ có thể được sử dụng:

Trong trường hợp không có vật liệu và thiết bị cần thiết để thực hiện phép phân tích bằng màng lọc;

Khi phân tích nước có hàm lượng chất rắn lơ lửng cao;

Trong trường hợp hệ vi sinh vật lạ chiếm ưu thế trong nước, điều này ngăn cản việc sản xuất các khuẩn lạc coliform thông thường bị cô lập trên các bộ lọc.

8.3.3. nguyên tắc phương pháp

Phương pháp này dựa trên sự tích tụ vi khuẩn sau khi cấy một lượng nước xác định vào môi trường dinh dưỡng lỏng, tiếp theo là cấy truyền trên môi trường dinh dưỡng đậm đặc khác biệt với lactoza và xác định các khuẩn lạc bằng các thử nghiệm nuôi cấy và sinh hóa.

8.3.4. Thực hiện phân tích

Trong nghiên cứu về nước uống phương pháp định tính(giám sát vệ sinh dịch tễ hiện hành, kiểm soát sản xuất) cấy 3 thể tích 100 ml.

Khi nghiên cứu nước với mục đích định lượng OKB và TKB khi phân tích lại thì cấy: 3 thể tích 100 ml, 3 thể tích 10 ml, 3 thể tích 1 ml.

Mỗi thể tích nước thử được cấy vào môi trường lactoza-pepton được chuẩn bị theo 5.5. Tiến hành cấy 100 ml và 10 ml nước trong 10 và 1 ml môi trường lactose-peptone đậm đặc, 1 ml mẫu được cấy trong 10 ml môi trường có nồng độ bình thường.

Cây trồng được ủ ở (37 ± 1) °C trong 48 giờ, không sớm hơn 24 giờ. quá trình ủ được thực hiện đánh giá sơ bộ cây trồng. Từ các vật chứa, nơi ghi nhận sự có mặt của sự phát triển (độ đục) và sự hình thành khí, một vòng vi khuẩn được cấy vào các vùng của môi trường Endo (mục 5.4.1) để thu được các khuẩn lạc riêng biệt.

Các vật chứa không có sự phát triển và hình thành khí được để trong máy điều nhiệt và được kiểm tra lần cuối sau 48 giờ. Từ các vật chứa nơi ghi nhận độ đục và sự hình thành khí hoặc chỉ độ đục, quá trình tạo hạt được thực hiện trên các cung của môi trường Endo.

Cấy trên môi trường Endo được ủ ở nhiệt độ (37 ± 1) °C trong (18-20) giờ.

Với sự hình thành độ đục và khí trong môi trường tích tụ và sự phát triển trên môi trường Endo của các khuẩn lạc điển hình của vi khuẩn dương tính với đường sữa: màu đỏ sẫm hoặc đỏ, có hoặc không có ánh kim loại, lồi với tâm màu đỏ và dấu vết trên chất dinh dưỡng môi trường, chúng cho phản ứng tích cực với sự hiện diện của vi khuẩn coliform thông thường trong một thể tích mẫu nhất định.

Sự hiện diện của OKB là cần thiết để được xác nhận:

Nếu chỉ ghi nhận độ đục trong môi trường tích tụ;

Nếu thuộc về các khuẩn lạc dương tính với đường sữa là nghi vấn của nhà nghiên cứu. Trong những trường hợp này:

Kiểm tra dấu ấn trên môi trường của Endo sau khi lặp lại một thuộc địa đáng ngờ;

Thực hiện phép thử oxidase theo 8.2.3.2;

Xác nhận thuộc Gram theo khoản 8.2.3.3;

Khả năng sinh khí được khẳng định bằng cách cấy 1-2 khuẩn lạc riêng biệt của mỗi loại từ mỗi khu vực trên môi trường có lactoza theo điều 5.6, sau đó ủ các dịch cấy ở nhiệt độ (37 ± 1) ° C cho ( 24-48) giờ.

Trong trường hợp không có khuẩn lạc riêng biệt, quá trình sàng được thực hiện trên môi trường Endo bằng phương pháp vi khuẩn học thông thường.

Một câu trả lời phủ định được đưa ra nếu:

Không có dấu hiệu tăng trưởng trong môi trường tích lũy;

Không có sự tăng trưởng trên các lĩnh vực của môi trường Endo;

Các khuẩn lạc không đặc trưng của vi khuẩn coliform (trong suốt với các cạnh lởm chởm, mờ, v.v.) phát triển trên các khu vực của môi trường Endo;

Tất cả các khuẩn lạc đều dương tính với oxidase;

Tất cả các khuẩn lạc là Gram dương;

Nếu sự hình thành khí không được ghi nhận trong phép thử khẳng định trên môi trường có carbohydrate.

Để xác định vi khuẩn coliform chịu nhiệt làm việc với các phần của môi trường Endo nơi các khuẩn lạc dương tính với lactoza điển hình đã phát triển. Gieo 2-3 khuẩn lạc riêng biệt của mỗi loại từ mỗi khu vực trong các ống nghiệm với bất kỳ môi trường lactoza nào được chuẩn bị theo đoạn 5.6.

Trước khi gieo, môi trường được đun nóng trong bể nước hoặc trong máy điều nhiệt đến 44°C. Ngay sau khi cấy, các ống được đặt trong máy điều nhiệt và ủ ở nhiệt độ (44 ± 0,5) °C trong 24 giờ, có thể xem mẫu cấy sau (4-6) giờ.

Với sự hình thành khí trong môi trường tích tụ, sự phát triển của vi khuẩn dương tính với đường sữa trên môi trường Endo và phát hiện khả năng lên men đường sữa của những vi khuẩn này thành axit và khí trong 24 giờ ở nhiệt độ 44 ° C, họ đã cho một câu trả lời tích cực cho sự hiện diện của một mẫu trong tập này TKB nước. Trong tất cả các trường hợp khác, họ đưa ra một câu trả lời tiêu cực.

Có thể tăng tốc độ đưa ra phản ứng với sự hiện diện của TKB để cấy 1 ml từ các thể tích của môi trường tích lũy, trong đó độ đục và sự hình thành khí được ghi nhận trong ống nghiệm có môi trường lactoza-peptone có phao theo 5.6 và được gia nhiệt trước đến nhiệt độ 44 °C. Cây trồng được giữ trong máy điều nhiệt ở nhiệt độ (44 ± 0,5) ° C trong 24 giờ, nếu phát hiện có axit và khí, chúng sẽ cho kết quả dương tính.

8.3.5. Kế toán kết quả

Trong nghiên cứu về 3 thể tích 100 ml, các kết quả được đánh giá một cách định tính và nếu OKB và TKB được phát hiện ở ít nhất một trong 3 thể tích, thì một mục nhập sẽ được thực hiện trong giao thức “tìm thấy trong 100 ml”.

Trong nghiên cứu của phương pháp định lượng, số có xác suất lớn nhất (MPN) của OKB và TKB được xác định theo Bảng. 1.1 ứng dụng 1.

Kết quả được báo cáo mà không có khoảng tin cậy.

Trong trường hợp phản hồi tiêu cực về sự hiện diện của TKB và TKB trong tất cả các thể tích được điều tra, kết luận được đưa ra trong giao thức “không tìm thấy trong 100 ml”.

8.4. Xác định bào tử clostridia khử sulfit

8.4.1. Định nghĩa khái niệm chỉ tiêu

Clostridia khử sulfite là các vi sinh vật kỵ khí hình que tạo bào tử khử sulfite natri trên thạch sulfite sắt ở nhiệt độ (44 ± 1) ° C trong (16-18) giờ.

8.4.2. nguyên tắc phương pháp

Phương pháp này dựa trên việc nuôi cấy cây trồng trong môi trường thạch sulfit sắt ở điều kiện gần với điều kiện kỵ khí và đếm số lượng khuẩn lạc màu đen.

8.4.3. Thực hiện phân tích

8.4.3.1. Một mẫu nước 20 ml được đun nóng trong bể nước trong các ống nghiệm ở nhiệt độ (75 ± 5)°C trong 15 phút để loại trừ các dạng sinh dưỡng.

Trong nghiên cứu về nước clo hóa, có thể bỏ qua việc đun nóng mẫu.

Từ mỗi mẫu nước uống, 20 ml được nuôi cấy hoặc lọc. Nếu cần, hãy chọn các thể tích sao cho không quá 10-15 khuẩn lạc mọc trên cây trồng (trên bộ lọc). Trong trường hợp này, họ được hướng dẫn bởi kết quả của các nghiên cứu trước đó.

Quá trình lọc nước được thực hiện theo các yêu cầu quy định tại đoạn 7.

8.4.3.2. Xác định bằng cách lọc trong ống nghiệm

Trước khi cấy, đun chảy các ống thạch sắt sulfit đã chuẩn bị theo 5.8 trong nồi cách thủy (không đun sôi!). Trong quá trình gieo, môi trường được giữ nóng đến (70-80) °C trong nồi cách thủy.

Sau khi lọc được lượng nước đã định, màng lọc được gắp bằng nhíp flambéed bằng hai cạnh đối diện và uốn cong theo dạng ống được đặt vào ống nghiệm có thạch nóng. Mặt của bộ lọc có vi khuẩn đã lắng hướng vào trong. Trong trường hợp này, bộ lọc được làm thẳng và nằm dọc theo thành ống nghiệm.

Ngay sau khi cấy, ống có thạch và màng lọc để tạo điều kiện kỵ khí được làm lạnh nhanh bằng cách đặt vào hộp chứa có nước lạnh. Canh tác cây trồng ở (44 ± I) °C trong (16-18) giờ.

8.4.3.3. Xác định bằng cách lọc trong đĩa Petri

Các đĩa Petri có đường kính (55-60) mm được đổ đầy một lớp mỏng thạch sắt sulfit. Sau khi lọc, đặt màng lọc úp mặt lọc xuống môi trường dinh dưỡng đã đông đặc sao cho không có bọt khí dưới màng lọc. Sau đó đổ thạch sắt sulfit nóng chảy lên trên miệng đĩa sao cho nắp vừa khít với môi trường để tạo điều kiện kỵ khí. Canh tác cây trồng ở (44 ± 1) ° C trong (16 - 1 8) giờ.

8.4.3.4. Xác định bằng gieo hạt trực tiếp

Các lọ thạch sắt sulfit và mẫu nước được chuẩn bị như mô tả trong 8.4.3.1.

Cho vào ống nghiệm vô trùng:

10 ml trong 2 ống nghiệm (thể tích ít nhất 30 ml) hoặc

5 ml vào 4 ống nghiệm (mỗi ống 15 ml).

Cây trồng được đổ thạch sắt sulfit nóng với lượng vượt quá 2 lần thể tích nước. Đổ môi trường dọc theo thành ống nghiệm, tránh tạo bọt khí. Sau đó, ống được làm lạnh nhanh bằng cách đặt vào thùng chứa nước lạnh để tạo điều kiện yếm khí. Các chất cấy được ủ ở (44 ± 1) °C trong (16-18) giờ.

8.4.4. Kế toán kết quả

Chỉ những loại cây trồng thu được các khuẩn lạc biệt lập mới phải tính toán định lượng. Đếm các khuẩn lạc màu đen, mọc cả trên màng lọc và độ dày của môi trường dinh dưỡng.

Kết quả phân tích được biểu thị bằng số lượng đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) của bào tử clostridia khử sulfite trong 20 ml nước.

Nếu không có khuẩn lạc màu đen mọc trên tất cả các bộ lọc, câu trả lời là “không tìm thấy trong 20 ml nước”.

Nếu không thể đếm được các khuẩn lạc do sự phát triển hợp lưu, thì kết quả được đánh giá là định tính, quy trình ghi chú “tìm thấy trong 20 ml”. Nếu cần, để thu được kết quả định lượng, phân tích được lặp lại.

8.5. Định nghĩa của coliphages

8.5.1. Định nghĩa khái niệm chỉ tiêu

Coliphages là vi rút vi khuẩn có khả năng ly giải E. coli và hình thành ở nhiệt độ (37 ± 1)°C sau (18 ± 2) h các vùng (mảng) vi khuẩn ly giải cỏ trên thạch dinh dưỡng.

8.5.2. Phương pháp chuẩn độ để xác định coliphages

8.5.2.1. nguyên tắc phương pháp

Việc xác định coliphages trong nước uống bao gồm sự tích lũy sơ bộ của coliphages trong môi trường làm giàu trên môi trường nuôi cấy E. coli và sau đó xác định các vùng ly giải (khai sáng) của bãi cỏ E. coli trên thạch dinh dưỡng.

8.5.2.2. khu vực ứng dụng

Phương pháp này nhằm mục đích giám sát chất lượng nước uống hiện tại.

8.5.2.3. Chuẩn bị cấy thử E. coli K12 StrR.

Ở tất cả các giai đoạn của nghiên cứu, huyền phù vi khuẩn được chuẩn bị theo cách sau: dịch cấy E. coli được cấy vào ống nghiệm có thạch dinh dưỡng đặt nghiêng có chứa streptomycin (mục 5.3.5). Sau (18 ± 2) giờ ủ ở nhiệt độ (37 ± 1) ° C, rửa sạch vi khuẩn khỏi khớp bằng 5 ml nước muối vô trùng (dung dịch NaCl 0,85%) và chuẩn bị huyền phù theo tiêu chuẩn độ đục. của E. coli với nồng độ 109 tế bào vi khuẩn trong 1 ml.

Được phép sử dụng dịch nuôi cấy E. coli trong canh trường 4 giờ thu được bằng cách nuôi cấy trong máy điều nhiệt ở nhiệt độ 37°C. Nồng độ 109 tế bào vi khuẩn E. coli chứa trong 2 ml.

8.5.2.4. Tiến hành phân tích định tính

Thêm 10 ml canh thang dinh dưỡng 10 lần (được chuẩn bị theo điều 5.2.2) và 1 ml nước rửa nuôi cấy thử nghiệm đã chuẩn bị sẵn hoặc 2 ml canh trường nuôi cấy 4 giờ (điều 8.5.2.3) vào nước thử nghiệm. mẫu với thể tích 100 ml.

Để kiểm soát quá trình nuôi cấy, 0,1 ml dịch rửa E. coli (hoặc 0,2 ml dịch nuôi cấy trong canh trường 4 giờ) được cho vào đĩa Petri và phủ thạch dinh dưỡng.

Mẫu nước thử nghiệm (100 ml) và đĩa Petri có kiểm soát E. coli được đặt trong máy điều nhiệt và ủ ở nhiệt độ (37 ± 1) °C trong (18 ± 2) giờ.

Sau khi ủ, đổ 10 ml mẫu nước thử vào ống nghiệm và thêm 1 ml cloroform.

Đậy ống bằng nút cao su hoặc silicon vô trùng, lắc mạnh để chloroform phân bố đều trên thể tích mẫu và để ở nhiệt độ phòng trong ít nhất 15 phút cho đến khi chloroform kết tủa hoàn toàn.

Trong thạch dinh dưỡng đã được làm nóng chảy trước và làm lạnh đến (45-49) °C, thêm dịch rửa của vi khuẩn E. coli đã chuẩn bị (mục 8.5.2.3) với tỷ lệ 1,0 ml dịch rửa (hoặc 2 ml canh thang 4 giờ nuôi cấy) trên 100 ml thạch.

Chuyển 1 ml mẫu được xử lý bằng cloroform (không chạm vào cloroform) vào đĩa Petri vô trùng bằng pipet từ ống nghiệm và đổ đầy hỗn hợp thạch dinh dưỡng đã tan chảy và làm lạnh đến (45-49) ° C với thể tích (12-15) ml, cũng như một đĩa Petrid bổ sung để nuôi cấy E. coli đối chứng và lắc nhẹ để trộn đều mẫu nước và thạch. Để đông đặc hoàn toàn, các cốc được để trên bàn ở nhiệt độ phòng trong 10 phút. Sau khi đông đặc, các cốc được lật ngược và đặt trong máy điều nhiệt trong (18 ± 2) giờ ở 37°C.

Khi thực hiện một loạt các mẫu, một điều khiển chung được đặt cho toàn bộ chuỗi.

Kế toán kết quả

Xem cây trồng được thực hiện trong ánh sáng truyền qua.

Mẫu được coi là dương tính khi có hiện tượng ly giải hoàn toàn, làm trong một số mảng, một mảng bám trên đĩa với mẫu nước trong trường hợp không có vùng ly giải trên đĩa đối chứng.

Phiếu phân tích ghi: có hoặc không có coliphag trong 100 ml nước (kết quả định tính).

Nếu có vùng ly giải trong kiểm soát nuôi cấy, kết quả được coi là không hợp lệ.

8.5.2.5. Thực hiện phân tích định lượng

Rót mẫu nước tra với lượng 100 ml thành 6 thể tích: 1 lọ 50 ml và 5 ống nghiệm 10 ml. Đối với 50 ml mẫu, thêm 5 ml canh thang dinh dưỡng gấp 10 lần (theo 5.2.2) và 0,5 ml nước rửa (hoặc 1 ml canh trường nuôi cấy trong 4 giờ) vi khuẩn E. coli (mục 8.5.2.3) . Vào mỗi 10 ml mẫu, thêm 1 ml canh thang dinh dưỡng gấp 10 lần và 0,1 ml nước rửa (hoặc 0,2 ml canh trường nuôi cấy trong 4 giờ) vi khuẩn E. coli.

Để kiểm soát nuôi cấy, OD ml nước rửa vi khuẩn (hoặc 0,2 ml canh trường nuôi cấy trong 4 giờ) của E. coli được đặt trong đĩa Petri và chứa đầy thạch dinh dưỡng.

Cây trồng được ủ ở nhiệt độ (37 ± 1) °C trong 18 ± 2 giờ.

Sau khi ủ, đổ 10 ml từ thể tích 50 ml vào ống nghiệm. Thêm 1 ml cloroform vào cả 6 thể tích mẫu thử. Đậy các ống nghiệm bằng nút cao su hoặc nút silicon vô trùng, lắc mạnh để cloroform phân bố đều trên thể tích mẫu và để ở nhiệt độ phòng ít nhất 15 phút để cloroform kết tủa.

Trong thạch dinh dưỡng đã được làm tan chảy và làm nguội trước đó đến (45-49) °C, thêm dịch rửa của vi khuẩn E. coli đã chuẩn bị (mục 8.5.2.3) với tỷ lệ 1,0 ml nước rửa (hoặc 2 ml dịch nuôi cấy trong canh trường 4 giờ). ) trên 100 ml thạch . Đổ hỗn hợp đã chuẩn bị vào các đĩa Petri: 1 cốc để kiểm soát quá trình nuôi cấy E. coli về khả năng sinh ly và một cốc cho mỗi mẫu nước đang nghiên cứu. Với việc phân tích đồng thời một số mẫu nước, một biện pháp kiểm soát vi khuẩn E. coli được đặt.

Sau khi thạch đông lại, các đĩa dùng để cấy mẫu được chia thành 6 khu vực, được dán nhãn phù hợp với thể tích đang nghiên cứu. Nhỏ 1 giọt chất nổi phía trên (không có chloroform) bằng pipet Pasteur (micropipette hoặc vòng vi khuẩn có hành trình dọc) vào từng khu vực từ ống nghiệm tương ứng.

Sau khi các giọt khô, đặt các cốc có mẫu thử và cốc đối chứng vào máy điều nhiệt ở nhiệt độ (37 ± 1) °C trong (18 ± 2) giờ.

Kế toán kết quả

Các kết quả được xem trong ánh sáng truyền qua.

Kế toán được thực hiện bởi sự hiện diện của các vùng giác ngộ (ly giải) trên các khu vực của bãi cỏ E. coli.

Khi sử dụng phương pháp gieo hạt nhỏ giọt bằng pipet, vùng ly giải được hình thành dưới dạng một đốm tròn hoặc các mảng riêng lẻ. Khi gieo một nét dọc với một vòng vi khuẩn, dọc theo nét đó sẽ thấy hiện tượng ly giải.

Mẫu được coi là dương tính nếu có vùng ly giải trên ít nhất một khu vực trong trường hợp không có vùng ly giải trên tấm đối chứng.

Việc đánh giá được thực hiện theo bảng số lượng có thể xảy ra nhất (MPN) của các đơn vị hình thành mảng bám (PFU) (Bảng 1.2). Quy trình phân tích cho biết số lượng trực khuẩn thể có thể xảy ra nhiều nhất trong 100 ml nước và phạm vi biến động có thể xảy ra: LF PFU (giới hạn dưới - giới hạn trên) của khuẩn trực khuẩn trong 100 ml. Kết quả là bán định lượng.

Nếu có các vùng ly giải trong đĩa đối chứng, kết quả được coi là không hợp lệ.

8.5.3. Phương pháp trực tiếp để xác định coliphages

.một. nguyên tắc phương pháp

Việc xác định coliphages trong nước uống bao gồm nghiên cứu thể tích nước chuẩn hóa (100 ml) bằng cách cấy trực tiếp và sau đó đăng ký các vùng ly giải (mảng) trên bãi cỏ E. coli trong đĩa Petri với thạch dinh dưỡng.

8.5.3.2. Miền

Phương pháp phân lập trực tiếp coliphage từ nước được tiến hành song song với phương pháp chuẩn độ trong các nghiên cứu theo chỉ định dịch.

8.5.3.3. Tiến hành phân tích

Trong thạch dinh dưỡng nồng độ gấp đôi (tr. 5.3.2), đun chảy và làm lạnh đến (45-49) ° C, thêm dịch rửa E. coli (tr. 8.5.2.3) với tỷ lệ 2,0 ml dịch rửa (hoặc 4 ml canh cấy trong 4 giờ) cho mỗi 100 ml thạch, trộn đều. Rót 100 ml nước đã khảo sát vào các ống nghiệm lớn 20 ml, đun nóng đến (35-44)°C và đổ ngay (không quá 5 phút sau khi đạt nhiệt độ yêu cầu) vào 5 đĩa Petri và thêm ngay 20 ml vào mỗi đĩa hỗn hợp thạch với nuôi cấy E. coli.

Để kiểm soát quá trình nuôi cấy E. coli, cho 20 ml nước máy vô trùng đã được làm nóng trước đến (35-44) ° C vào một đĩa Petri, đổ 20 ml thạch E. coli đã chuẩn bị và trộn nhẹ nhàng.

Khuấy nhẹ lượng chứa trong cốc và để ở nhiệt độ phòng cho đến khi đông đặc. Úp ngược các đĩa có thạch đông lạnh vào máy điều nhiệt và ủ ở nhiệt độ (37 ± 1) °C trong (18 ± 2) giờ.

Kế toán kết quả

Xem cây trồng được thực hiện trong ánh sáng truyền qua.

Việc tính toán kết quả được thực hiện bằng cách đếm và tính tổng các mảng mọc trên 5 đĩa Petri. Kết quả được biểu thị bằng đơn vị hình thành mảng bám (PFU) trên 100 ml mẫu nước. Không nên có mảng bám trong đĩa đối chứng.

Thông thường, các vùng ly giải trông giống như những đốm trong suốt trên nền của bãi cỏ nuôi cấy thử nghiệm thạch dinh dưỡng ở dạng các mảng tròn bị cô lập (đường kính từ 1 đến 5-7) mm với các đường viền được xác định rõ ràng hoặc bị xóa.

Ở nồng độ phage cao, một mô hình ly giải khác được quan sát thấy.

Sự kết hợp của các khuẩn lạc âm tính tạo ra một bãi cỏ “lộ thiên” của E. coli, sự phát triển của các khuẩn lạc E. coli đơn lẻ trên nền của quá trình ly giải liên tục hoặc hoàn toàn không có sự phát triển trên đĩa.

Khi cấy trực tiếp, quá trình ly giải có thể xảy ra, được che phủ bởi thạch đông đặc không đồng nhất, cũng như được đóng lại bởi hệ vi sinh vật đi kèm. Các giọt thạch ngưng tụ và đông đặc không đồng nhất từ ​​quá trình cấy trực tiếp có thể dẫn đến sự hình thành các vật phẩm giả trong bãi cỏ E. coli trông giống như quá trình ly giải.

Có thể tiến hành hạch toán sơ bộ kết quả sau (5-6) giờ ủ. Ở giai đoạn này, với sự hiện diện của các vùng ly giải rõ ràng, câu trả lời sơ bộ về sự hiện diện của coliphages trong nước có thể được đưa ra.

Kết quả định lượng cuối cùng của cấy trực tiếp được thực hiện sau (18 ± 2) giờ Kết quả được biểu thị bằng số lượng đơn vị tạo mảng (PFU) trên 100 ml mẫu nước.

Nếu sự phát triển của mảng bám hợp lưu được ghi nhận và việc đếm gặp khó khăn, thì có thể đưa ra kết quả định tính theo cách gieo trực tiếp: “tìm thấy trong 100 ml nước”.

Nếu thu được kết quả âm tính khi làm việc với phương pháp trực tiếp, câu trả lời cuối cùng được đưa ra theo kết quả của phương pháp chuẩn độ.

Nếu có các vùng ly giải trong đĩa đối chứng, kết quả của nghiên cứu được coi là không hợp lệ.

8.5.4. Thiết lập điều khiển

8.5.4.1. Kiểm soát tiêu cực

Kiểm soát âm tính xác nhận không có nhiễm phage trong môi trường dinh dưỡng, dụng cụ thủy tinh trong phòng thí nghiệm, thiết bị ở giai đoạn chuẩn bị và phân tích, đồng thời cho phép bạn đánh giá khả năng nuôi cấy thử nghiệm E . coli để tạo ra một bãi cỏ đồng nhất.

Kiểm soát tiêu cực là nghiên cứu nước máy vô trùng, được thực hiện tương tự như mẫu nước được phân tích. Vì vậy, khi phân tích nước bằng phương pháp chuẩn độ, 10 ml nước máy vô trùng được thêm vào một ống nghiệm bổ sung. Khi phân tích nước bằng cách cấy trực tiếp, 20 ml nước máy vô trùng được thêm vào đĩa Petri thứ sáu bổ sung.

Các cây trồng bổ sung được kiểm tra coliphages theo cách tương tự như các mẫu chính.

Khi phân tích một loạt mẫu, có thể có một đối chứng âm cho từng loại phân tích: chuẩn độ và trực tiếp. Trong trường hợp này, kiểm soát tiêu cực được tổ chức sau khi xử lý tất cả các mẫu của chuỗi này.

Nếu các mảng coliphages được tìm thấy trong các đĩa kiểm soát âm tính, thì kết quả nghiên cứu toàn bộ chuỗi mẫu nước là không hợp lệ.

Cần kiểm tra độ vô trùng của dụng cụ thí nghiệm, đồ dùng, môi trường dinh dưỡng và cấy nhắc lại đối chứng về độ thuần của chủng xét nghiệm E. coli K12 F + StrR.

Tần suất kiểm soát tiêu cực - 1 lần mỗi ngày.

8.5.4.2. Phương pháp khẳng định bản chất phage của ly giải

Trong trường hợp nghi ngờ, khi làm việc với cả phương pháp chuẩn độ và phương pháp trực tiếp, cần tiến hành cấy đối chứng để xác nhận bản chất phage của quá trình ly giải.

Với mục đích này, một vòng lặp vi khuẩn học được sử dụng để loại bỏ một phần thạch nghi ngờ có khuẩn lạc, đặt nó vào 5 ml canh thang dinh dưỡng, trong đó một giọt vi khuẩn thử nghiệm E. coli được thêm vào và ủ ở 37 ° C trong (16 -18) giờ. Dịch nuôi cấy thu được được xử lý bằng cloroform và kiểm tra sự hiện diện của thể thực khuẩn. Việc tạo giống được thực hiện bằng que cấy vòng hoặc pipet trên các vùng thạch dinh dưỡng theo cách tương tự như mô tả trong đoạn 8.5.2.5. Ly giải trên bất kỳ lĩnh vực nào được coi là xác nhận sự hiện diện của phage.

Với phương pháp phân tích nước này, một lượng nước nhất định được đưa qua một màng đặc biệt có kích thước lỗ khoảng 0,45 micron. Kết quả là tất cả vi khuẩn có trong nước vẫn còn trên bề mặt màng lọc. Sau đó, màng có vi khuẩn được đặt trong một thời gian nhất định trong môi trường dinh dưỡng đặc biệt ở nhiệt độ 30-37 ° C. Trong giai đoạn này, được gọi là thời kỳ ủ bệnh, vi khuẩn có cơ hội nhân lên và hình thành các khuẩn lạc rõ ràng, dễ đếm. Kết quả là, bạn có thể quan sát điều này: Hoặc thậm chí là bức ảnh này: Vì phương pháp phân tích nước này chỉ liên quan đến việc xác định tổng số khuẩn lạc hình thành vi khuẩn các loại khác nhau, thì bằng kết quả của nó, không thể đánh giá một cách dứt khoát sự hiện diện của vi khuẩn gây bệnh trong nước. Tuy nhiên, số lượng vi sinh vật cao cho thấy nước bị ô nhiễm vi khuẩn nói chung và khả năng cao là có sự hiện diện của các sinh vật gây bệnh.

Khi phân tích nước không chỉ cần kiểm soát hàm lượng chất độc chất hóa học, mà còn là số lượng vi sinh vật đặc trưng cho sự ô nhiễm vi khuẩn của nước uống, TMF là tổng số vi sinh vật, trong nước cấp nước tập trung, con số này không được vượt quá 50 CFU / ml, và trong giếng, giếng - không quá 100 CFU / ml

Nghiên cứu vệ sinh và vi sinh của nước được thực hiện theo kế hoạch
cho mục đích giám sát hiện tại, cũng như cho dịch tễ học đặc biệt
kim chứng. Các đối tượng chính của nghiên cứu như vậy là:

- nước uống từ nguồn cấp nước trung tâm (nước máy);

- nước uống của hệ thống cấp nước ngoài tập trung;

- nước từ các nguồn nước mặt và nước ngầm;

— nước thải;

- nước vùng ven biển;

- Nước hồ bơi.

Các chỉ tiêu chính để đánh giá tình trạng vi sinh của nước ăn uống theo các văn bản quy định hiện hành là:

1. Tổng số vi khuẩn (TMC) - số lượng vi khuẩn ưa ấm trong 1 ml nước.

Nếu tiêu chuẩn- thể tích nước nhỏ nhất (tính bằng ml) trong đó có ít nhất một người sống
tế bào vi sinh vật liên quan đến BGKP.
chỉ số BGKP- lượng BGKP trong 1 lít nước.

3. Số lượng bào tử clostridia khử sulfit trong 20 ml nước.

4. Số lượng trực khuẩn trong 100 ml nước.

Việc xác định TMC giúp đánh giá mức độ ô nhiễm vi sinh của nước uống. Chỉ số này là không thể thiếu để phát hiện khẩn cấp ô nhiễm vi sinh vật lớn.

Tổng số lượng vi sinh vật- đây là số lượng vi sinh vật hiếu khí trung bình và kỵ khí tùy ý có khả năng hình thành khuẩn lạc trên thạch dinh dưỡng ở nhiệt độ 37 ° C và trong vòng 24 giờ, có thể nhìn thấy ở mức tăng gấp đôi.

Khi xác định tổng số vi sinh vật, 1 ml nước thử nghiệm được thêm vào đĩa Petri vô trùng và 10-12 ml thạch dinh dưỡng nóng chảy (44 ° C) được đổ vào. Môi trường được trộn nhẹ nhàng với nước, đồng đều và
không có bọt khí phân bố dọc theo đáy cốc thì đậy nắp lại và để đông đặc lại. Cây trồng được ủ trong máy điều nhiệt ở 37°C trong 24 giờ. Đếm lên toàn bộ các khuẩn lạc mọc ở cả hai đĩa và xác định giá trị trung bình. Kết quả cuối cùng được biểu thị bằng số lượng đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) trong 1 ml nước thử nghiệm. 1 ml nước uống không được chứa quá 50 CFU

Định nghĩa của BGKP
Đồng thời xác định được vi khuẩn coliform thông thường - OKB và vi khuẩn coliform chịu nhiệt - TKB.

GKB là vi khuẩn gram âm, không sinh bào tử, lên men đường lactose thành axit và khí ở 37°C trong 24-48 giờ. TKB nằm trong số các OKB, chúng có dấu hiệu riêng, nhưng tôi lên men ở 44 ° C. Để xác định vi khuẩn đường ruột - phương pháp màng lọc hoặc chuẩn độ.

Số lượng vi sinh vật - tiêu chí chính để đánh giá trạng thái vi sinh vật của nước uống, dựa trên các văn bản quy định hiện hành, là TMC (tổng số vi sinh vật), đặc trưng cho số lượng vi khuẩn hiếu khí và kỵ khí trong một mililit nước, được hình thành mỗi ngày ở nhiệt độ 37 độ, trong môi trường dinh dưỡng.

Các chỉ tiêu chất lượng nước ăn uống của hệ thống cấp nước.

Chỉ số này hầu như không thể thiếu để phát hiện nhanh chóng ô nhiễm vi sinh vật lớn.

Vì Xác định tổng số vi sinh vật một ml nước thử nghiệm được thêm vào đĩa Petri vô trùng, sau đó 10-15 ml thạch dinh dưỡng ấm (khoảng 44 ° C) ở dạng nóng chảy được đổ vào. Môi trường được trộn cẩn thận với nước, phân bố đều và không có bọt khí trên đáy đĩa, sau đó đậy nắp lại và để trong đĩa Petri cho đến khi đông đặc. Điều tương tự được thực hiện trong cốc khác. Gieo trong máy điều nhiệt được ủ ở nhiệt độ 37°C vào ban ngày. Sau đó, ở độ phóng đại gấp đôi dưới kính hiển vi, tổng số khuẩn lạc mọc trong hai cốc được đếm và giá trị trung bình được xác định. Trong 1 ml nước uống không được quá 50 CFU.

(phương pháp chính)

Phương pháp này dựa trên việc lọc một lượng nước nhất định (300 ml) qua các bộ lọc màng, trồng trọt trên môi trường chẩn đoán phân biệt với đường sữa (Endo) và sau đó xác định các khuẩn lạc bằng các đặc điểm nuôi cấy và sinh hóa.

Bộ lọc màng được chuẩn bị để phân tích (đun sôi hoặc khử trùng theo cách khác) được đặt bằng nhíp vô trùng vào phễu của thiết bị lọc. Một lượng nước đo được được đổ vào phễu của thiết bị và tạo ra chân không. Sau khi lọc xong, màng lọc được lấy ra và đặt lên bề mặt môi trường dinh dưỡng Endo mà không cần lật ngược.

Một cốc có thể phù hợp với 3 bộ lọc. Trong nghiên cứu về nước uống, 3 thể tích 100 ml được lọc. khi phân tích nước chưa rõ chất lượng, nên lọc các thể tích nước khác để thu được các khuẩn lạc phân lập được trên màng lọc (10,40, 100 và 150 ml).

Các đĩa lọc được ủ lộn ngược trong tủ ấm ở nhiệt độ t 37°C trong 24 giờ.

Nếu không có sự phát triển trên các bộ lọc hoặc các khuẩn lạc mờ, mốc, màng không điển hình đã phát triển, chúng sẽ cho kết quả âm tính. OKB và TKB không có trong 100 ml nước nghiên cứu.

Với sự phát triển của các khuẩn lạc dương tính với lactoza phân lập điển hình (màu đỏ sẫm có in ở mặt sau của bộ lọc) trên các bộ lọc, số lượng của chúng được đếm và chúng bắt đầu xác nhận chúng thuộc về OKB và TKB.

Tiến hành kiểm tra bằng kính hiển vi các phết từ 3-4 khuẩn lạc nhuộm Gram (có tính đến các khuẩn lạc gram âm);

Sự hiện diện của oxidase được xác định (những chất âm tính với oxidase được tính đến, vì các que gram âm dương tính với oxidase không thuộc về vi khuẩn đường ruột, nhưng có thể, ví dụ, pseudomonads);

Quá trình lên men của đường sữa thành axit và khí được xác định ở nhiệt độ 37 ° C, điều này rất quan trọng đối với các khuẩn lạc hơi có màu và mối quan hệ của chúng với TKB, và ở nhiệt độ 44 ± 0,5 ° C, để quyết định xem chúng có thuộc TKB.

Thiết lập một thử nghiệm oxyase

Trên giấy được làm ẩm bằng dung dịch cồn 1% của α-naphthol và 1% dung dịch nước dimethylphenylenediamine, bôi một phần khuẩn lạc có màu bằng vòng bạch kim hoặc que thủy tinh. phản ứng được coi là dương tính nếu trong vòng 1 phút, tối đa là 4 phút, xuất hiện màu xanh lam hoặc tím. Các khuẩn lạc dương tính với oxidase không được tính đến và không được nghiên cứu thêm.

Có thể chuyển giấy lọc có khuẩn lạc sang giấy thấm thuốc thử. Bạn có thể sử dụng hệ thống giấy làm sẵn (NIB) được làm ẩm bằng nước cất.

Một phần khuẩn lạc của vi khuẩn gram âm oxidaza được kiểm tra khả năng lên men đường lactoza. Điều này sử dụng môi trường bán lỏng với đường sữa và chất chỉ thị pH. Việc gieo được thực hiện bằng cách tiêm vào đáy trong 2 ống nghiệm. Một loại được ủ ở nhiệt độ 37 ± 1 ° C trong 24-48 giờ để xác nhận mối quan hệ với TKB, loại còn lại ở nhiệt độ 44 ± 0,5 ° C trong 24 giờ, có thể đăng ký sau 4-6 giờ để xác nhận sự hiện diện của TKB.

Khi xếp các khuẩn lạc lên bộ lọc, chúng được sàng lọc, sau đó các khuẩn lạc phân lập thu được được xác định. Các khuẩn lạc được tính là OKB - nếu chúng có màu đỏ trên Endo, chúng chứa các que gram âm oxidase âm tính phân hủy đường sữa ở nhiệt độ 37 ° C thành axit và khí. Các khuẩn lạc được tính là TKB nếu chúng chứa các trực khuẩn gram âm oxidaza âm tính lên men lactoza ở nhiệt độ 44°C thành axit và khí (Đề án số 2).

KẾ HOẠCH № 2

Ngày xuất bản: 2014-11-02; Đọc: 1811 | Trang vi phạm bản quyền

studopedia.org - Studopedia.Org - 2014-2018.(0,001 s) ...

Tổng số lượng vi sinh vật

Với phương pháp phân tích nước này, một lượng nước nhất định được đưa qua một màng đặc biệt có kích thước lỗ khoảng 0,45 micron. Kết quả là tất cả vi khuẩn có trong nước vẫn còn trên bề mặt màng lọc. Sau đó, màng có vi khuẩn được đặt trong một thời gian nhất định trong môi trường dinh dưỡng đặc biệt ở nhiệt độ 30-37 ° C. Trong giai đoạn này, được gọi là thời kỳ ủ bệnh, vi khuẩn có cơ hội nhân lên và hình thành các khuẩn lạc rõ ràng, dễ đếm. Kết quả là, bạn có thể quan sát điều này: Hoặc thậm chí là bức ảnh này: Vì phương pháp phân tích nước này chỉ liên quan đến việc xác định tổng số loại vi khuẩn hình thành khuẩn lạc thuộc các loại khác nhau nên kết quả của nó không thể đánh giá rõ ràng sự hiện diện của vi khuẩn gây bệnh trong nước. Tuy nhiên, số lượng vi sinh vật cao cho thấy nước bị ô nhiễm vi khuẩn nói chung và khả năng cao là có sự hiện diện của các sinh vật gây bệnh.

Khi phân tích nước không chỉ cần kiểm soát hàm lượng các hóa chất độc hại mà còn phải kiểm soát cả số lượng vi sinh vật đặc trưng cho sự nhiễm khuẩn của nước ăn uống TMF là tổng số vi sinh vật có trong nước của nguồn cấp nước tập trung, con số này nên không vượt quá 50 CFU/ml, và trong giếng, giếng - không quá 100 cfu/ml

Nghiên cứu vệ sinh và vi sinh của nước được thực hiện theo kế hoạch
cho mục đích giám sát hiện tại, cũng như cho dịch tễ học đặc biệt
kim chứng. Các đối tượng chính của nghiên cứu như vậy là:

- nước uống từ nguồn cấp nước trung tâm (nước máy);

- nước uống của hệ thống cấp nước ngoài tập trung;

- nước từ các nguồn nước mặt và nước ngầm;

- nước thải;

- nước vùng ven biển;

- Nước hồ bơi.

Các chỉ tiêu chính để đánh giá tình trạng vi sinh của nước ăn uống theo các văn bản quy định hiện hành là:

1. Tổng số vi khuẩn (TMC) - số lượng vi khuẩn ưa ấm trong 1 ml nước.

Nếu tiêu chuẩn- thể tích nước nhỏ nhất (tính bằng ml) trong đó có ít nhất một người sống
tế bào vi sinh vật liên quan đến BGKP.
chỉ số BGKP- lượng BGKP trong 1 lít nước.

3. Số lượng bào tử clostridia khử sulfit trong 20 ml nước.

4. Số lượng trực khuẩn trong 100 ml nước.

Việc xác định TMC giúp đánh giá mức độ ô nhiễm vi sinh của nước uống. Chỉ số này là không thể thiếu để phát hiện khẩn cấp ô nhiễm vi sinh vật lớn.

Tổng số lượng vi sinh vật- đây là số lượng vi sinh vật hiếu khí trung bình và kỵ khí tùy ý có khả năng hình thành khuẩn lạc trên thạch dinh dưỡng ở nhiệt độ 37 ° C và trong vòng 24 giờ, có thể nhìn thấy ở mức tăng gấp đôi.

Khi xác định tổng số vi sinh vật, 1 ml nước thử nghiệm được thêm vào đĩa Petri vô trùng và 10-12 ml thạch dinh dưỡng nóng chảy (44 ° C) được đổ vào. Môi trường được trộn nhẹ nhàng với nước, đồng đều và
không có bọt khí phân bố dọc theo đáy cốc thì đậy nắp lại và để đông đặc lại. Cây trồng được ủ trong máy điều nhiệt ở 37°C trong 24 giờ. Đếm tổng số khuẩn lạc mọc ở cả hai đĩa và xác định giá trị trung bình. Kết quả cuối cùng được biểu thị bằng số lượng đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) trong 1 ml nước thử nghiệm. 1 ml nước uống không được chứa quá 50 CFU

Định nghĩa của BGKP
Đồng thời xác định được vi khuẩn coliform thông thường - OKB và vi khuẩn coliform chịu nhiệt - TKB.

GKB là vi khuẩn gram âm, không sinh bào tử, lên men đường lactose thành axit và khí ở 37°C trong 24-48 giờ. TKB nằm trong số các OKB, chúng có dấu hiệu riêng, nhưng tôi lên men ở 44 ° C. Để xác định vi khuẩn đường ruột - phương pháp màng lọc hoặc chuẩn độ.

Số lượng vi sinh vật - tiêu chí chính để đánh giá trạng thái vi sinh vật của nước uống, dựa trên các văn bản quy định hiện hành, là TMC (tổng số vi sinh vật), đặc trưng cho số lượng vi khuẩn hiếu khí và kỵ khí trong một mililit nước, được hình thành mỗi ngày ở nhiệt độ 37 độ, trong môi trường dinh dưỡng. Chỉ số này hầu như không thể thiếu để phát hiện nhanh chóng ô nhiễm vi sinh vật lớn.

Vì Xác định tổng số vi sinh vật một ml nước thử nghiệm được thêm vào đĩa Petri vô trùng, sau đó 10-15 ml thạch dinh dưỡng ấm (khoảng 44 ° C) ở dạng nóng chảy được đổ vào. Môi trường được trộn cẩn thận với nước, phân bố đều và không có bọt khí trên đáy đĩa, sau đó đậy nắp lại và để trong đĩa Petri cho đến khi đông đặc.

Nguyên tắc phân bổ nước uống

Điều tương tự được thực hiện trong cốc khác. Gieo trong máy điều nhiệt được ủ ở nhiệt độ 37°C vào ban ngày. Sau đó, ở độ phóng đại gấp đôi dưới kính hiển vi, tổng số khuẩn lạc mọc trong hai cốc được đếm và giá trị trung bình được xác định. Trong 1 ml nước uống không được quá 50 CFU.

OKB là một bằng cấp quốc tế và chúng được đưa vào nhóm lớn BGKP (vi khuẩn thuộc nhóm Escherichia coli). Hàm lượng OKB trong nước có thể được xác định bằng hai phương pháp: phương pháp màng lọc và phương pháp chuẩn độ (lên men).

Khảo sát nước bằng phương pháp màng lọc. Phương pháp này dựa trên việc lọc một lượng nước xác định qua màng lọc, trồng trọt trên môi trường chẩn đoán phân biệt và sau đó xác định các khuẩn lạc bằng các đặc điểm nuôi cấy và sinh hóa.

Phương pháp chuẩn độ để nghiên cứu nước. Phương pháp này dựa trên sự tích tụ vi khuẩn sau khi cấy một lượng nước xác định vào môi trường dinh dưỡng lỏng, sau đó cấy lại trên môi trường chẩn đoán phân biệt và xác định các khuẩn lạc bằng các xét nghiệm nuôi cấy và sinh hóa.
"Sinh vật Coliform" thuộc nhóm vi khuẩn gram âm, hình que, sống và sinh sản ở vùng bụng dưới. đường tiêu hóa người và nhiều loài động vật máu nóng như - gia súc và thủy cầm, có khả năng lên men đường lactoza ở 35-37 0C tạo thành axit, khí và aldehyde. Khi ở trong nước có phân, chúng có thể sống sót trong vài tuần, mặc dù phần lớn chúng không có khả năng sinh sản.

Theo các nghiên cứu gần đây, cùng với các vi khuẩn Escherichia (E.Coli), Citrobacter, Enterobacter và Klebsiela thường được xếp vào lớp này, các vi khuẩn Enterobacter cloasae và Citrobadter freundii có khả năng lên men đường Lactose cũng thuộc lớp này. Những vi khuẩn này có thể được tìm thấy không chỉ trong phân mà còn trong môi trường và ngay cả trong nước uống có nồng độ chất dinh dưỡng tương đối cao. Ngoài ra, điều này bao gồm các loài hiếm khi hoặc không được tìm thấy trong phân và có thể sinh sản trong nước có chất lượng khá tốt.

TKB - vi khuẩn coliform chịu nhiệt. Số lượng TCB đặc trưng cho mức độ ô nhiễm phân của nước trong thủy vực và gián tiếp xác định mức độ nguy hiểm của dịch bệnh liên quan đến tác nhân gây bệnh truyền nhiễm đường ruột. TKB được xác định theo các phương pháp tương tự như BGKP (OKB).
Việc lấy mẫu cho các nghiên cứu vệ sinh và vi sinh phải được thực hiện tuân thủ các quy tắc vô trùng và tất cả các điều kiện cần thiết được quy định cho từng đối tượng được nghiên cứu bởi các văn bản quy định có liên quan.

Lỗi lấy mẫu dẫn đến kết quả không chính xác. Khi đóng gói và vận chuyển mẫu, cần tạo điều kiện loại trừ sự chết hoặc sinh sản của hệ vi sinh vật ban đầu trong đối tượng nghiên cứu. Do đó, các mẫu được thu thập phải được chuyển đến phòng thí nghiệm để phân tích càng sớm càng tốt.